[发明专利]基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸电化学检测方法

说明书

本发明基于聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)构建了一种肌氨酸电化学检测方法，实现复杂样品中肌氨酸的检测。首先对玻碳电极(GCE)进行预处理，将二甲基甲酰胺(DMF)溶液作为溶剂制备PAA溶液，并进行超声处理，然后将上述溶液沉积在GCE表面，并在室温下干燥过夜，随后将均匀分散的戊二醛溶液滴加到上述GCE表面，并在25℃下干燥2小时以形成膜，最后，将SOX溶液滴在改性的GCE上形成SOX层，用于肌氨酸的检测。PAA是具有阳离子络合性质的聚合物，由于其羧基作用，可以作为还原剂来提高该电化学方法的灵敏度，从而实现对肌氨酸的灵敏检测。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种肌氨酸电化学检测方法，更具体地，涉及一种基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸电化学检测方法。

背景技术

前列腺癌(PCa)是男性中的常见癌症，具有递增的发生率以及高的转移和复发风险。前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤。2004年WHO《泌尿系统及男性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》中前列腺癌病理类型上包括腺癌(腺泡腺癌)、导管腺癌、尿路上皮癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌。其中前列腺腺癌占95％以上，因此，通常我们所说的前列腺癌就是指前列腺腺癌。2012年我国肿瘤登记地区前列腺癌发病率为9.92/10万，列男性恶性肿瘤发病率的第6位。发病年龄在55岁前处于较低水平，55岁后逐渐升高，发病率随着年龄的增长而增长，高峰年龄是70～80岁。家族遗传型前列腺癌患者发病年龄稍早，年龄≤55岁的患者占43％。

因此，其早期检测对于提高存活率是至关重要的。目前，游离前列腺特异性抗原(fPSA)的百分比是诊断PCa患者的唯一诊断指标。然而，由于fPSA的低浓度和短半衰期，它经常导致假阴性测试结果。最近的研究表明，肌氨酸在前列腺癌患者细胞和尿液中均有增高，肌氨酸诊断PCa的准确率高于fPSA。更重要的是，肌氨酸可以容易地在尿中检测到。这种行为使肌氨酸成为PCa临床诊断的一种非侵入性检测。

当前肌氨酸的检测方法主要包括两种。一种是肌氨酸的直接测定，其通常包括色谱法和质谱法。上述技术的主要缺点是仪器成本高、操作复杂，这不适合于临床诊断。另一种是间接定量，其可以通过检测由肌氨酸氧化酶(SOX)和肌氨酸反应产生的H₂O₂来实现，包括比色法，荧光计和电化学方法。其中，电化学方法由于其操作简单，灵敏度高，选择性高等优点，备受关注。

目前已有一些关于肌氨酸的检测方法专利，如中国专利200910265395.7公开了一种肌氨酸的检测方法，该方法包括：向毛细管中注入运行缓冲液，并向所述毛细管内注入样品溶液，在所述毛细管两端施加电压，进行毛细管电泳电化学发光检测。该发明选择吡啶钌系衍生物作为发光试剂，并优选使用具有高灵敏度和高稳定性的联吡啶钌，通过简单的仪器，实现了对肌氨酸高效、快速地检测，并且此种方法较色谱-质谱联法相对便宜，但该发明可检测的样品溶液仅限被稀释的肌氨酸溶液，无法实现对复杂样品中肌氨酸的检测。

因此，本发明旨在提供一种肌氨酸的电化学检测方，该法方法可实现对复杂样品中的肌氨酸进行电化学检测，并且具有显著的灵敏度。

发明内容

为解决背景技术中存在的技术问题，本发明提供一种肌氨酸的电化学检测方法，具体地，是一种基于聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)的肌氨酸电化学检测方法，以实现对复杂样品中的肌氨酸进行电化学检测，并且具有显著的灵敏度。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

(1)聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)在玻碳电极(GCE)上的固定化

1)将二甲基甲酰胺(DMF)溶液作为溶剂制备聚酰胺酸(PAA)溶液，并将聚酰胺酸(PAA)溶液超声处理至PAA完全溶解，得超声处理后的聚酰胺酸(PAA) 溶液；

2)将步骤1)得到的聚酰胺酸(PAA)溶液沉积在玻碳电极(GCE)表面，并在室温下干燥过夜,得到PAA修饰的玻碳电极(GCE)；