[发明专利]一种固定化效果良好的啤酒复合酶的制备方法

说明书

本发明提供了一种固定化效果良好的啤酒复合酶的制备方法，包括以下步骤：1)称取配制复合酶；2)向复合酶加入生物素和亲和素，再加入pH值为4～5的缓冲溶液，搅拌均匀，混入体积百分比为2.0％～3.5％的海藻酸钠溶液，再次搅拌均匀至无气泡；3)将混合液缓慢挤出至氯化钙溶液中，在‑18℃～‑20℃的条件下固定2‑4h，得到澄清剂。亲和素与生物素的结合，特异性强、亲和力大，一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以形成一种类似晶格的稳定复合体，而且亲和素容易和海藻酸钠结合在一起、生物素容易和酶结合在起来，“海藻酸钠‑亲和素‑生物素‑复合酶”的结合方式使得固定化材料与复合酶之间具有更好的固定化效果。

技术领域

本发明属于酿酒技术领域，具体涉及一种固定化效果良好的啤酒复合酶的制备方法。

背景技术

啤酒中的蛋白质和啤酒中的多酚或醛糖结合引起的混浊、沉淀；啤酒原辅料中的果胶也会引起啤酒混浊，需要利用中性蛋白酶和菠萝蛋白酶分解蛋白质使其不能和多酚结合、利用果胶酶把果胶分解有利于固体粒子沉降，从而起到澄清啤酒的目的。现有的啤酒复合酶固定化率并不是100％；固定化后酶活力会发生变化，酶和底物之间的亲和能力减弱；啤酒复合酶澄清剂多次使用之后固定化效果下降。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种固定化效果良好的啤酒复合酶的制备方法，利用亲和素以及生物素解决固定化材料与复合酶之间作用力不足，提高啤酒复合酶澄清剂循环使用的效果。

技术方案如下：

一种固定化效果良好的啤酒复合酶的制备方法，包括以下步骤：

1)称取配制复合酶；

2)向复合酶加入生物素和亲和素，再加入pH值为4～5的缓冲溶液，搅拌均匀，混入体积百分比为2.0％～3.5％的海藻酸钠溶液，再次搅拌均匀至无气泡；

3)将混合液缓慢挤出至氯化钙溶液中，在-18℃～-20℃的条件下固定2-4h，得到澄清剂；

进一步，还可以包括步骤：4)用生理盐水冲洗澄清剂2-3次，0～4℃保藏。

其中，所述氯化钙溶液的百分比浓度为1％～2％。所述复合酶包括果胶酶，还包括中性蛋白酶、菠萝蛋白酶中的至少一种。

生物素是合成维生素C的必要物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的稳定复合体，而且亲和素容易和海藻酸钠结合在一起、生物素容易和酶结合在起来，“海藻酸钠-亲和素-生物素-复合酶”的结合方式使得固定化材料与复合酶之间具有更好的固定化效果。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

实施例1，一种利用亲和素提高啤酒复合酶固定化效果的方法。

其包括以下步骤：

1)称取配制复合酶；

2)向复合酶加入生物素和亲和素，再加入pH值为4～5的缓冲溶液，搅拌均匀，混入体积百分比为2.0％～3.5％的海藻酸钠溶液，再次搅拌均匀至无气泡；

3)将混合液缓慢挤出至氯化钙溶液中，在-18℃～-20℃的条件下固定2-4h，得到澄清剂；