[发明专利]一种鉴别中华鰧与日本鰧的分子标记引物及方法

说明书

本发明公开了一种鉴别中华鰧与日本鰧的分子标记引物及方法，引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。鉴别方法的具体步骤为：提取中华鰧与日本鰧的DNA，以两种鱼的DNA为模板进行PCR扩增，对扩增结果进行纯化、测序，比对测序结果。有益效果为：本发明分子标记引物对PCR反应的扩增较为合适，能够有效避免引起非特异性扩増或扩增效率下降，增大PCR反应的成功性，提高鉴别结果的准确性和稳定性；本发明鉴别方法结果稳定、可重复性强、鉴别方法简单、不同个体的扩增结果一致、表现出高度的一致性。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，尤其是涉及一种鉴别中华鰧与日本鰧的分子标记引物及方法。

技术背景

中华鰧和日本鰧一样，在分类学上属于硬骨鱼纲、鲈形目、龙鰧亚目、鰧科、鰧属。中华鰧体粗，尾部侧扁，眼间隔凹陷达眼后缘。眶前骨下缘有2枚短棘，前鳃盖骨下缘有4~5枚尖棘。背鳍2个。体背侧红褐色，具白色花斑，腹侧白色。第一背鳍黑色。为暖水性底层鱼类，栖息于沙泥底质海区，水深一般为35~120m。分布于我国东海、南海、台湾海峡及日本南部海域。中华鰧同日本鰧一样，皆为浙江近海重要的经济鱼种。其肉质细腻鲜美，具有较高的食用价值。目前用于鉴定中华鰧的分子标记方法还没有见正式报道。由于二者形态非常相似，仅凭借形态特征很难将两者区分。因此寻找区分中华鰧和日本鰧的可靠标准，从混杂的种质中鉴别、分离种质成为一个迫不及待的问题。这将有助于解决种质混杂等问题，为种质保护、合理利用以及种质的生物多样性研究提供技术支撑。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种对PCR反应的扩增较为合适，能够有效避免引起非特异性扩増或扩增效率下降，增大PCR反应的成功性，提高鉴别结果的准确性和稳定性的鉴别中华鰧与日本鰧的分子标记引物。

本发明的目的之二在于提供一种结果稳定、可重复性强、鉴别方法简单、不同个体的扩增结果一致、表现出高度的一致性的鉴别中华鰧与日本鰧的方法。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种鉴别中华鰧与日本鰧的分子标记引物，引物序列为：

12SF：5’-GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’；

12SR：5’-CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’。

本发明分子标记引物的长度、上下游引物长度的差对PCR反应的扩增较为合适，且上下游引物的T_m值的差在5℃以内，能够有效避免引起非特异性扩増或扩增效率下降，增大PCR反应的成功性，提高鉴别结果的准确性和稳定性。

本发明还提供一种利用上述的引物鉴别中华鰧与日本鰧的方法，具体步骤如下：提取中华鰧与日本鰧的DNA，以两种鱼的DNA为模板进行PCR扩增，对扩增结果进行纯化、测序，比对测序结果。

作为优选，测序结果显示中华鰧与日本鰧种内遗传差异不大于1%。

作为优选，中华鰧的分子标记序列为：CACCGCGGTTATACGAGAGGCTCAAGCTGATAGACCACGGCGTAAAGAGTGGTTAGGGAAAATTTTACAATAAAGCCGAGAGTCGACAGAGCAGTCATACGCATCCGAGAGAGAAAGGCCAATCACGAAAGTAGCTTTATCACCCCTGAACCCACGAAAGCTAGGACA。

作为优选，日本鰧的分子标记序列为：

CACCGCGGTTATACGAGAGGCTCAAGCTGATAGCCCAACGGCGTAAAGAGTGGTTAAGGGAGTATTTTCAATAAAGCCGAGAATCAACAAAGCAGTTATACGCACCCGAAAAAAAAAGACCGATCACGAAAGTAGCTTTAACACCCCTGAGCCCACGAAAGCTAGGACA。