[发明专利]一种猪瘟口服弱毒冻干疫苗用冻干保护剂及应用

权利要求书

1.一种猪瘟口服弱毒冻干疫苗用冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂包括牛血清白蛋白BSA、甘露醇、甘氨酸、乳糖和水；所述冻干保护剂包括质量百分含量为3%的牛血清白蛋白BSA、2%的甘露醇、2%的甘氨酸、5-6%的乳糖，余量为水。

2.根据权利要求1所述的猪瘟口服弱毒冻干疫苗用冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂的制备方法是：将质量百分含量为3%的牛血清白蛋白BSA、2%的甘露醇、2%的甘氨酸、5%的乳糖，88%的去离子水，混合均匀后经高压灭菌备用。

3.一种制备权利要求2所述的猪瘟口服弱毒冻干疫苗用冻干保护剂的方法，其特征在于，制备方法是：将质量百分含量为3%的牛血清白蛋白BSA、2%的甘露醇、2%的甘氨酸、5%的乳糖，88%的去离子水，混合均匀后经高压灭菌备用。

4.权利要求1-2中任一项所述的猪瘟口服弱毒冻干疫苗用冻干保护剂在制备猪瘟口服弱毒冻干疫苗中的应用，其特征在于，所述猪瘟口服弱毒冻干疫苗的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，按照常规方法复苏、传代ST细胞，待ST细胞单层细胞融合度达80％左右时，弃去细胞上清，PBS洗涤一次；加入200μL稀释后的猪瘟活疫苗毒株，37℃吸附1h；然后弃去上清，加入含2％FBS的DMEM维持液继续培养；每天观察细胞状态，72h后收毒，将细胞放于-20℃/室温反复冻融3次，然后12000rpm离心10min，去除细胞碎片，吸取200μL上清继续重复上述操作，进行病毒的传代培养；

步骤二，将收获的病毒液混合取样后按照《中华人民共和国兽药典》附录规定的方法进行RID的测定，测定结果显示混合样大于5×10⁵RID/ml；

步骤三，冻干保护剂的制备：将质量百分含量为3%的牛血清白蛋白BSA、2%的甘露醇、2%的甘氨酸、5-6%的乳糖，余量为去离子水，混合均匀后经高压灭菌备用；

步骤四，配苗、冻干及分装：在冻干保护剂中按照10000RID每头份的量加入一定量的猪瘟弱毒病毒液，混匀后分装为2ml/瓶，置于冻干机内，经预冻、升华过程冻干疫苗形成成品；

步骤五，成品检验：按照《中华人民共和国兽药典》附录规定的方法对成品进行无菌检验、霉菌检验、支原体检验、安全性检验和效力检验均合格，置于2～8℃保存备用；

步骤六，稀释液制备：每升疫苗稀释液含有：130mM氯化钠，3.0mM氯化钾，10mM磷酸氢二钠，2mM磷酸二氢钠，1.2-1.5g卡波姆，2.4-3.0g左旋咪唑，2-4g蜂胶提取物，2-5g的黄芪多糖，1-2g的玉竹多糖；所述疫苗稀释液的制备方法为：按以上用量将氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、卡波姆、左旋咪唑、蜂胶提取物、黄芪多糖和玉竹多糖溶解于注射用水中，定容至1L，按每头份3-5mL的规格分装后，于121℃高压灭菌20min后备用；

步骤七，将步骤五制备得到的冻干疫苗和步骤六制备得到的稀释液按一头份的量进行组合，装盒、装箱后保存。