[发明专利]一种血栓弹力图法定量检测口服凝血因子Xa抑制剂试剂盒及其制备方法

说明书

一种血栓弹力图法定量检测口服凝血因子Xa抑制剂试剂盒，包括缓冲剂、凝血因子Xa、兔脑凝脂、凝血因子活化剂、支持剂、生物防腐剂；制备方法包括：配制缓冲液、凝血因子Xa储备液、凝血因子活化剂储备液、生物防腐液、兔脑凝脂储备液；取支持剂加入缓冲液配制成支持液；按试剂盒规格要求将凝血因子Xa、凝血因子活化剂、兔脑凝脂储备液加到支持液中，混匀后加入生物防腐液、再加入缓冲溶液至规定量，混匀后分装冻干。本发明能通过血栓弹力图检测法，方便准确地对样本中的口服凝血因子Xa抑制剂进行定量检测，样本采用全血，无需进行额外处理，对凝血瀑布中的蛋白完整性亦无要求，简化了检验流程，方便了医生和患者，极具推广应用价值。

技术领域

本发明涉及一种血栓弹力图法定量检测口服凝血因子Xa抑制剂试剂盒及其制备方法，属于医疗器械技术领域。

背景技术

血栓性疾病是一种常见的心脑血管疾病，是由血栓引起的血管腔狭窄与闭塞，使主要脏器发生缺血和梗死而引发机能障碍的各种疾病，在临床上常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死及静脉血栓栓塞等；目前，临床上治疗血栓性疾病的药物主要有抗血小板药物、溶血栓药和抗凝血药物三大类；由于传统的抗凝血药物在临床使用中的局限性，新型口服抗凝药物如凝血因子Xa抑制剂等成为了研究热点并逐步走向临床。

凝血因子X(英文为：Coagulation Factor X；简称：FX)是一种维生素K依赖的丝氨酸蛋白酶原，其基因位于第13号染色体(13q34)，含8个外显子和7个内含子，8个外显子分别编码FX的7个结构功能区。FX活化为FXa时，重链N端Arg52和Ile53之间的肽键被切断，掉下一52氨基酸肽；FⅨa、FⅧa、Ca²⁺和磷脂复合物FⅦa、组织因子、Ca²⁺复合物可激活FX；此外，Russell’s蛇毒(RVV)、锯鳞蝰蛇毒(SSVV)、肿瘤坏死因子等也可激活FX；FXa是参与血液凝固过程的关键蛋白组分，也是抗血栓药物的重要靶点，其生理抑制剂主要是抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)和α2-巨球蛋白(α-MG)。

FX活性缺乏或减少见于先天性和获得性缺乏症，FX活性增高主要见于高凝状态和血栓栓塞性疾病。

Xa因子属于丝氨酸蛋白酶，其在凝血瀑布反应中有着重要作用，可通过内、外源性凝血路径予以激活，其所处位置的特殊性直接决定自身的重要性。

利伐沙班、阿哌沙班和依度沙班等是口服Xa因子抑制剂，通常为固定剂量，目前尚没有专门的剂量监测试验；利伐沙班是全球第一个直接Xa因子抑制剂，能高度选择性地直接抑制呈游离或结合状态的Xa因子，产生抗凝作用，具有生物利用度高、治疗疾病谱广、量效关系稳定、口服方便和出血风险低等特点；作为新型抗凝药物，利伐沙班通过口服吸收，药效持久，一天可只服药一次，其治疗窗宽且无需常规凝血功能监测，这些优势使利伐沙班成为抗心脑血管和血液系统疾病的新宠。

但新型抗凝药物的使用过程中，亦存在着一定的出血风险，尤其在使用剂量较大或在合并肝肾功能严重异常的患者身上使用时，出血和凝血功能障碍都是不可忽视的严重问题。

因此，口服Xa因子抑制剂类新型抗凝药物的剂量监测已成为亟需解决的问题。

现有技术中，Xa因子抑制剂常用检测方法包括：

1)凝血酶原时间(PT)：PT检测模仿外源性凝血的全部条件，反映外源性凝血是否正常，成人为参考值11～15秒，检测时，要求整个凝血瀑布中的所有蛋白都是完整的；现有的不同PT试剂对利伐沙班的敏感性差异大，目前临床上常用的检测PT方法为比浊凝固法，与利伐沙班血药浓度的相关性差；采用Neoplastin Plus法测定PT评估利伐沙班的抗凝作用，该方法使用的检验试剂国际敏感度指数(international sensitivity index，ISI)比较高，与血浆利伐沙班血浆浓度相关性好，呈剂量依赖性。