[发明专利]慢病毒感染试剂及其制备方法与应用有效
申请号: | 201810935831.6 | 申请日: | 2018-08-16 |
公开(公告)号: | CN109055432B | 公开(公告)日: | 2020-10-13 |
发明(设计)人: | 傅坚刚;邵悦;蒋涛华 | 申请(专利权)人: | 南京科佰生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867 |
代理公司: | 北京酷爱智慧知识产权代理有限公司 11514 | 代理人: | 王莹 |
地址: | 210028 江苏省南京市栖霞区*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 病毒感染 试剂 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种慢病毒感染试剂,其特征在于:
所述试剂由第一组合物和第二组合物组成;
所述第一组合物为浓度为1-200mg/ml的二油酰基L-α-磷脂酰乙醇胺溶液;
所述第二组合物为浓度为5-500mg/ml的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物溶液;
所述第一组合物和所述第二组合物分别独立包装。
2.权利要求1所述的慢病毒感染试剂的制备方法,其特征在于:
所述第一组合物的制备方法包括步骤:将水和二油酰基L-α-磷脂酰乙醇胺混合,然后过滤除菌,配制得到浓度为1-200mg/ml的二油酰基L-α-磷脂酰乙醇胺溶液,4℃保存备用;其中,所述水为无菌水;
所述第二组合物的制备方法包括步骤:将水和聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物混合,然后过滤除菌,配制得到浓度为5-500mg/ml的聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物溶液,4℃保存备用;其中,所述水为无菌水。
3.权利要求1所述的慢病毒感染试剂在慢病毒技术中的应用。
4.一种采用权利要求1所述的慢病毒感染试剂感染细胞的方法,其特征在于,包括步骤:
S1:将待感染细胞消化离心后,接种到孔板的培养基中;
S2:将所述第一组合物和所述第二组合物混合均匀,得到感染试剂;
S3:将所述感染试剂加入至含待感染细胞的培养基中,然后加入融化后的慢病毒,混合均匀后,感染预设时间;
S4:感染结束后,去除剩余的慢病毒和感染试剂,将感染后的细胞继续培养。
5.根据权利要求4所述的采用慢病毒感染试剂感染细胞的方法,其特征在于:
步骤S1中,所述孔板为24孔板,每孔中待感染细胞的数量为20000-50000个。
6.根据权利要求4所述的采用慢病毒感染试剂感染细胞的方法,其特征在于:
步骤S2中,所述第一组合物和所述第二组合物的体积比为1:(0.3-3)。
7.根据权利要求4所述的采用慢病毒感染试剂感染细胞的方法,其特征在于:
步骤S3中,所述感染试剂和所述含待感染细胞的培养基的体积比为1:(100-5000)。
8.根据权利要求4所述的采用慢病毒感染试剂感染细胞的方法,其特征在于:
步骤S3中,所述感染的时间为24-72小时。
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