[发明专利]一种mRNA 3’末端混合建库的反转录引物及其用途在审
| 申请号： | 201810938925.9 | 申请日： | 2018-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN109055519A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 鲁非;王静;徐俊 | 申请（专利权）人： | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6876 | 分类号： | C12Q1/6876;C40B50/06;C12Q1/6806 |
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| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 反转录引物 建库 测序数据 文库构建 植物群体 重要意义 低成本 转录组 总RNA 改进 研究 | ||
1.一种mRNA 3’末端混合建库的反转录引物，所述反转录引物包含VN碱基。
2.根据权利要求1所述的mRNA 3’末端混合建库的反转录引物，其中所述反转录引物为96个mRNA的反转录引物。
3.根据权利要求1或2所述的mRNA 3’末端混合建库的反转录引物，其中所述反转录引物选自下表所示的反转录引物：
。
4.一种mRNA 3’末端混合建库的方法，所述方法包括使用权利要求1至3中的任一项所述的反转录引物对总RNA进行反转录。
5.根据权利要求4所述的方法，还可包括以下步骤：将反转录完毕的96个样本混合至一个管中，然后降解模板mRNA，得到反转录的产物。
6.根据权利要求4或5所述的方法，还可包括以下步骤：对反转录的产物进行纯化，并在纯化完成后加入二链合成酶进行二链合成。
7.根据权利要求4至6中的任一项所述的方法，还可包括以下步骤：进行文库片段大小选择，以回收长度150-600bp的片段。
8.根据权利要求4至7中的任一项所述的方法，还可包括以下步骤：进行PCR扩增，以富集模板DNA。
9.根据权利要求4至8中的任一项所述的方法，还可包括以下步骤：用等体积的BeckmanAgencourt AMPure XP beads纯化PCR产物，获得mRNA 3’末端混合文库。
10.一种mRNA 3’末端混合建库的方法，所述方法包括：
使用权利要求1至3中的任一项所述的反转录引物对总RNA进行反转录；
将反转录完毕的96个样本混合至一个管中，然后降解模板mRNA，得到反转录的产物；
对反转录的产物进行纯化，并在纯化完成后加入二链合成酶进行二链合成；
进行文库片段大小选择，以回收长度150-600bp的片段；
进行PCR扩增，以富集模板DNA；
用等体积的Beckman Agencourt AMPure XP beads纯化PCR产物，获得mRNA 3’末端混合文库。
11.一种使用权利要求1至3中的任一项所述的反转录引物进行混合建库的用途。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述的混合建库是mRNA 3’末端混合文库。
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