[发明专利]神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于体外检测技术领域。该试剂盒包括：链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的神经元特异性烯醇化酶单克隆抗体和偶联标记物标记的神经元特异性烯醇化酶单克隆抗体。本发明提供一种神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒的制备方法。本发明的神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒为全自动的测量样本，并直接给出数值，减少人为操作误差，并且实现无人值守，缩短了临床检测所需的时间，同时检测精度较高，试剂与仪器组成封闭系统，系统误差小。

技术领域

本发明属于体外检测技术领域，涉及一种神经元特异性烯醇化酶(NSE)化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

NSE是神经元及神经内分泌细胞三羧酸循环过程中催化2-磷酸甘油酸变成磷酸烯醇式丙酮酸的关键酶。基因核苷酸序列全长2423bp，编码434个氨基酸残基，生物半衰期可能大于20h，分子量为78kD，等电点pH4.7，是一种酸性蛋白酶。NSE是烯醇化酶基因家族成员之一，烯醇化酶是由α、β、γ三个亚基组成的二聚体，其同工酶分为αα、ββ、γγ、αγ和αβ五种。α亚基主要存在于肝、肾等组织，故称为非神经系统的烯醇化酶(NNE)；β亚基主要存在于骨骼肌和心肌，称为肌肉特异性的烯醇化酶(MSE)；γ亚基主要存在于神经组织，γγ、αγ组成的同工酶为神经元和神经内分泌细胞特有，故命名为神经元特异性烯醇化酶(neuro-specificenolase，NSE)。

在临床应用方面，NSE主要作为中枢神经系统损害的标志物，其分泌的动态变化可预示神经系统损伤的敏感性和特异性。常用于肿瘤诊断、监测治疗效果及预后评估等。多种中枢神经系统疾病如脑损伤、脑肿瘤、视网膜损伤、以及其他原因引起的脑损伤中，血中NSE浓度都会出现不同程度的升高，NSE可作为损伤的敏感性和特异性指标。

NSE是用于小细胞肺癌诊断的、具有高特异性和高灵敏性的肿瘤标记物，其特异性高达80％～90％。可用于鉴别诊断，监测小细胞肺癌放疗、化疗后的治疗效果。用神经元特异性烯醇化酶监测小细胞肺癌的复发，比临床确定复发要早4～12周；神经元特异性烯醇化酶还可用于神经母细胞瘤和肾母细胞瘤的鉴别诊断，并且监测神经母细胞瘤的病情变化，评价疗效和报告复发；

NSE在内分泌肿瘤中显示出很高的免疫活性，并且可以在血清中直接检出，因此可以用来监测肿瘤患者的病情进展，评价治疗效果。血清学检测比放射线检查、解剖学检查方便迅速，因此NSE作为肿瘤标记物在临床中的应用十分广泛。

目前我国获准上市的国产及进口试剂盒检测原理主要有酶联免疫法(ELISA)、电化学发光免疫法(ECLI)、时间分辨免疫荧光法(TRFIA)和化学发光免疫法(CLIA)。传统的酶联免疫法不仅操作繁琐，自动化程度低，受人为因素影响大，而且特异性及灵敏性都有待提高。电化学发光免疫法(ECLI)、时间分辨免疫荧光法(TRFIA)和化学发光免疫法(CLIA)具有灵敏度高、线性范围宽、操作简便、容易实现自动化的优点，是理想的临床微量生化检验分析手段。但是目前临床上检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)主要以国外进口试剂为主，国外进口试剂价格昂贵，货期长，给患者带来沉重的经济负担及诸多不便，不利于在基层医院推及。

化学发光免疫测定技术是一种高度敏感的微量测定技术，具备敏感性高、特异性强、测定范围宽、试剂稳定性好、操作简便等特点。目前基于化学发光免疫分析原理的检测仪器已成功商品化，如雅培诊断公司(Abbott)的ARCHITECT(i)型化学发光免疫分析仪及其配套试剂盒，采用吖啶酯标记抗体作为检测探针，抗体包被磁珠为反应载体，并结合自动化的检测系统，可快速检测多种疾病标志物。但是基于化学发光免疫技术用于检测NSE的国产试剂盒的研究相对较少，不能满足国内需求。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的检测NSE的方法检测时间长、灵敏度低、重复性差的问题，而提供一种神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。