[发明专利]早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法

说明书

本发明公开了早期胚胎停育程度相关的早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物，包括hsa‑miR‑136‑5p、hsa‑miR‑1301‑3p、hsa‑miR‑135b‑5p、hsa‑141‑3p、hsa‑miR‑19b‑3p以及hsa‑iR‑486‑5p。据此，发明人还以上述miRNAs生物标志物为目标设计了相应逆转录或实时荧光PCR引物。它们可以作为绒毛样本检测早期胚胎停育的生物标志物，或者用于制备诊断试剂或生物芯片等工具，对早期胚胎停育的诊断和治疗有重要潜在价值和应用前景，能够为以后从分子水平诊断人早期胚胎停育、组织及血清miRNAs的研究提供了理论依据，具有重大的理论意义和潜在的实用价值。

技术领域

本发明属于生物医学中生物标志物技术领域，尤其涉及早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法。

背景技术

早期胚胎停育(Early Embryonic Arrest，EEA)是女性不孕的主要原因之一。迄今为止，早期胚胎停育的病因尚不清楚，治疗方法有限，严重影响了育龄女性的身心健康。

MicroRNAs(miRNAs)是现代生物医学中的一种重要的调节分子，它通过对基因转录表达的调控，调控着人体所有细胞、组织和器官的各种功能，在人类疾病的发生和防治中具有十分重要的作用。大量研究发现，miRNAs可以广泛而稳定地存在于细胞外液，包括血清、血浆和组织间液之中，它们不仅是细胞内基因转录和表达的调节分子，还是细胞之间信息传递的信号分子。在病理过程中，组织液中miRNAs表达谱会发生特征性的改变，这些改变有助于对疾病进行诊断和预后判断，甚至与临床分期分级密切相关。

在正常机能状态下，机体内循环miRNAs种类及其表达丰度可能处于一个相对稳定、平衡的状态。早期胚胎停育发病时所产生的不同程度的、反复性的损伤过程，可能会直接或间接破坏绒毛组织miRNAs稳态，表现为异常代谢或特定疾病状态下某些组织miRNAs的表达水平显著性升高或降低。目前还未见有关早期胚胎停育绒毛组织miRNAs的公开报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法，为临床上早期胚胎停育的准确诊断提供支持。

为解决上述技术问题，本发明采用以上技术方案：

早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物，包括hsa-miR-136-5p、hsa-miR-1301-3p、hsa-miR-135b-5p、hsa-141-3p、hsa-miR-19b-3p以及hsa-iR-486-5p，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.6的碱基序列。

上述早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物，来自人绒毛组织。

早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物在制备诊断或者辅助诊断早期胚胎停育的试剂、试剂盒或生物芯片中的应用。

上述早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物在制备或筛选治疗早期胚胎停育的药物中的应用。

以上述早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物为目标设计的引物，包括序列表SEQ.ID.No.7至SEQ.ID.No.14的碱基序列。

上述引物在制备诊断或者辅助诊断早期胚胎停育的试剂、试剂盒或生物芯片中的应用。

上述引物在制备或筛选治疗早期胚胎停育的药物中的应用。

上述早期胚胎停育绒毛组织miRNAs生物标志物表达量的检测方法，包括以下步骤：

(1)总RNA提取