[发明专利]一种人工光源视觉系统损伤的评价方法

权利要求书

1.一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、将存储有人视网膜细胞的冻存管迅速放入37℃的水浴中解冻10min；

S2、将解冻后的人视网膜细胞转移到离心管中，以10000-12000rpm的转速离心3-5min，弃除上清；

S3、往离心管中加入3-5mLDMEM高糖培养液，轻轻混匀后接种于培养瓶中，然后置于培养箱中进行复苏培养，每两天更换一次培养液；

S4、当细胞在培养瓶中长满90％以上后，将培养液弃除，往培养瓶中加入灭菌胎牛血清清洗3遍；

S5、往培养瓶中加入2mL消化液，37℃消化30min；

S6、往含消化液的培养瓶中加入2mL完全培养液，终止消化液的消化作用；

S7、往清洗后的培养瓶中加入1.5mL 0.1％EDTA溶液，轻轻震荡将瓶底内的细胞溶解，使细胞完全脱落成细胞悬液；

S8、将细胞悬液转移到离心管中，并置于离心机中以10000-12000rpm的转速离心5min，弃除上清；

S9、往离心管中加入适量DMEM高糖培养液，然后将其转移到多个新培养瓶中，并置于培养箱中培养；

S10、按S4-S9的方法进行传代培养，往第3代或第4代细胞的培养箱中置入人工光源，分别选取12h、18h和24h光照培养的传代细胞进行后续实验；

S11、以上述光照培养的传代细胞为材料提取RNA，并以mRNA为模板逆转录合成cDNA，然后以cDNA为模板，对人视网膜细胞引起炎性因子设计特异引物进行荧光定量PCR，根据炎性因子的表达量判断人视网膜细胞的损伤情况。

2.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：所述人视网膜细胞为人视网膜色素上皮细胞或视网膜神经胶质细胞。

3.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：所述人视网膜细胞存储在冻存管中，然后将冻存管置于液氮中保存。

4.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：所述DMEM高糖培养液中含有10％体积的胎牛血清。

5.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：所述培养箱的培养条件为37℃，5％二氧化碳。

6.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：所述完全培养液包含20％胎牛血清、1％青链霉素和Hams-F12培养液。

7.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：所述消化液为0.5％胰蛋白酶。

8.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：所述人工光源包括LED灯、手机屏幕、笔记本屏幕。

9.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：S10步骤中设置有对照组，对照组以锡箔纸包裹避光培养。

10.根据权利要求1所述的一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，其特征在于：S11步骤中所述RNA的A260/280比值为1.9-2.0。