[发明专利]一种人工光源视觉系统损伤的评价方法

说明书

本发明具体公开了一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，步骤包括将存储有人视网膜细胞的冻存管放入37℃的水浴中解冻10min，往其中加入DMEM高糖培养液，并置于培养箱中进行复苏培养，然后对复苏后的细胞进行传代培养，往第3代或第4代细胞的培养箱中置入人工光源，分别选取12h、18h和24h光照培养的传代细胞进行后续实验，最后以上述光照培养的传代细胞为材料提取RNA，并以mRNA为模板逆转录合成cDNA，再以cDNA为模板，对人视网膜细胞引起炎性因子设计特异引物进行荧光定量PCR，根据炎性因子的表达量判断人视网膜细胞的损伤情况，本发明可以检测各种人工光源对视觉系统的损伤情况，高效、灵敏。

技术领域

本发明涉及一种视觉系统损伤的评价方法，特别涉及一种人工光源视觉系统损伤的评价方法。

背景技术

人视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)内含有黑色素颗粒，进入眼内的光线大部分经此层吸收。不同屈光状态下，由于色相差的缘故，RPE吸收的不同波长色光的光密度是不一样的，这可能对RPE的生长、形态、功能等有一定影响，从而影响视力。细胞生物学和分子生物学研究证实高色温LED光源对人眼角膜上皮细胞、晶体上皮细胞、人原代视网膜色素上皮细胞光损伤作用；有研究发现，高色温LED对小鼠视网膜外核层细胞有损伤，而对角膜和晶状体未见损伤。随着科技的发展，手机、笔记本等电子设备日益普及，人们暴露在电子设备光照的环境下的时间越来越长，但这些光照是否对人眼视网膜造成影响未能引起人们足够的重视。

因此，有必要对各种新型人工光源的安全谱及安全阈值进行进一步研究，建立一种新型人工光源视觉系统损伤评价的方法。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，可以检测各种人工光源对视觉系统的损伤情况，高效、灵敏。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种人工光源视觉系统损伤的评价方法，包括以下步骤：

S1、将存储有人视网膜细胞的冻存管迅速放入37℃的水浴中解冻10min；

S2、将解冻后的人视网膜细胞转移到离心管中，以10000-12000rpm的转速离心3-5min，弃除上清；

S3、往离心管中加入3-5mLDMEM高糖培养液，轻轻混匀后接种于培养瓶中，然后置于培养箱中进行复苏培养，每两天更换一次培养液；

S4、当细胞在培养瓶中长满90％以上后，将培养液弃除，往培养瓶中加入灭菌胎牛血清清洗3遍；

S5、往培养瓶中加入2mL消化液，37℃消化30min；

S6、往含消化液的培养瓶中加入2mL完全培养液，终止消化液的消化作用；

S7、往清洗后的培养瓶中加入1.5mL 0.1％EDTA溶液，轻轻震荡将瓶底内的细胞溶解，使细胞完全脱落成细胞悬液；

S8、将细胞悬液转移到离心管中，并置于离心机中以10000-12000rpm的转速离心5min，弃除上清；

S9、往离心管中加入适量DMEM高糖培养液，然后将其转移到多个新培养瓶中，并置于培养箱中培养；

S10、按S4-S9的方法进行传代培养，往第3代或第4代细胞的培养箱中置入人工光源，分别选取12h、18h和24h光照培养的传代细胞进行后续实验；

S11、以上述光照培养的传代细胞为材料提取RNA，并以mRNA为模板逆转录合成cDNA，然后以cDNA为模板，对人视网膜细胞引起炎性因子设计特异引物进行荧光定量PCR，根据炎性因子的表达量判断人视网膜细胞的损伤情况。

优选地，所述人视网膜细胞为人视网膜色素上皮细胞或视网膜神经胶质细胞。