[发明专利]一种饲用复合富硒益生的芽孢杆菌固态制剂及制备方法

权利要求书

1.一种饲用复合富硒益生的芽孢杆菌固体制剂，其特征在于：所述芽孢杆菌固体制剂经过两次发酵制成，先由复合芽孢杆菌在含硒的YPD培养基中，液态发酵，成熟后接种到由玉米粉、麸皮、菊糖、无机硒和自来水组成的固态培养基后混合均匀，固态发酵制得；

所述复合芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌的活化菌液和枯草芽孢杆菌的活化菌液按体积比1：1混合均匀制得；

所述芽孢杆菌固体制剂中地衣芽孢杆菌的含量为9.41´10⁹ CFU/g、枯草芽孢杆菌的含量为9.65´10⁹ CFU/g、有机硒含量为48.25±0.15 ug/g、无硒含量为1.83±0.05 g/g，pH值为7.46-7.61，有机硒转化率大于95.0%；货架时间90天内，地衣芽孢杆菌的活菌数量为9.31.±0.03´10⁸ CFU/g，枯草芽孢杆菌的活菌数量为6.33±0.03´10⁸CFU/g；

所述地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，保藏编号为CGMCC NO. 14245，保藏日期为2017年06月15日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，

所述枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，保藏编号为CGMCC NO. 14246，保藏日期为2017年06月15日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.制备权利要求1一种饲用复合富硒益生的芽孢杆菌固体制剂的方法，其特征在于：操作步骤如下：

（1）菌种的活化

将保存在-20 ℃的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于YPD液态培养基上，接种量3-5%，37℃培养30-36 h，如此连续活化3～5次，分别得到活化的地衣芽孢杆菌和活化的枯草芽孢杆菌；

（2）制备种子液

将活化的地衣芽孢杆菌和活化的枯草芽孢杆菌分别转接于YPD液态培养基中，转接种量1-3%，在YPD液态培养基中，添加无机硒至含量达到23.5-25.9 ug/ml，37℃培养24 h，分别得到地衣芽孢杆菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液；

（3）一次发酵

在1000毫升YPD液态培养基中加入51-57mg无水亚硒酸钠混匀；按体积比1%:1%的量混合接种地衣芽孢杆菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液，即地衣芽孢杆菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液各10毫升，37℃培养32h，得到一次发酵液；

（4）二次发酵制备饲用复合富硒益生的芽孢杆菌固体制剂

将22-28Kg玉米粉、71-77Kg麸皮、1-1.5Kg菊糖、7.65-8.1g无水无机硒、60L一次发酵液和7-7.5L自来水混合均匀，温度37℃、固态发酵32-33h，得到饲用复合富硒益生的芽孢杆菌固体制剂，粉碎，得到粉状的芽孢杆菌固体制剂。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）和步骤（3）中，所述液态YPD培养基由蛋白胨10.0g、牛肉膏 3.0g、氯化钠 5.0g和蒸馏水1000ml混合均匀，灭菌制得。