[发明专利]一种高效产生siRNA的烟草花叶病毒基因片段、弱毒疫苗、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种烟草花叶病毒基因片段，其特征在于，所述烟草花叶病毒基因片段包括TMV1片段、TMV2片段和TMV3片段中的至少一种，TMV1片段、TMV2片段和TMV3片段的核苷酸序列分别如Seq ID No.13、Seq ID No.14、Seq ID No.15所示，所述烟草花叶病毒基因片段在接种寄生植物后可产生siRNA。

2.一种抗烟草花叶病毒的弱毒疫苗，其特征在于，弱毒疫苗以TVBMV弱毒突变体为基础，TVBMV弱毒突变体中嵌入了可诱导对烟草花叶病毒产生交叉保护的有效基因片段，所述的有效基因片段包括可产生SiRNA的烟草花叶病毒基因片段；烟草花叶病毒基因片段包括TMV1片段、TMV2片段或TMV3片段，TMV1片段、TMV2片段和TMV3片段的核苷酸序列分别如SeqID No.13、Seq ID No.14、Seq ID No.15所示；

所述的TVBMV弱毒突变体由pCamTVBMV在HC-Pro 序列中进行四个位点突变获得，所述的位点突变为：52位的精氨酸突变为谷氨酸，198位的天冬氨酸突变为赖氨酸；第250位的异亮氨酸突变为天冬氨酸，251位的谷氨酰胺突变为谷氨酸。

3.根据权利要求2所述的一种抗烟草花叶病毒的弱毒疫苗，其特征在于，所述的TVBMV弱毒突变体中嵌入TMV1或TMV3片段。

4.根据权利要求2所述的一种抗烟草花叶病毒的弱毒疫苗，其特征在于，所述的TVBMV弱毒突变体中嵌入TMV3片段。

5.一种如权利要求2-4任一所述的抗烟草花叶病毒的弱毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）构建TVBMV弱毒突变体；

（2）获得可诱导对烟草花叶病毒产生交叉保护的烟草花叶病毒基因片段TMV1或TMV2或TMV3；

（3）将得到的TMV1或TMV2或TMV3基因片段插入TVBMV弱毒突变体，获得弱毒疫苗。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，以烟草花叶病毒的基因组为模板，利用PCR技术扩增得到TMV1或TMV2片段或TMV3，然后分别插入到TVBMV弱毒突变体的多克隆位点中，获得含有各基因片段的弱毒疫苗。

7.一种含有如权利要求2-4任一所述的抗烟草花叶病毒的弱毒疫苗的重组菌。

8.根据权利要求7所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌包括转入了弱毒疫苗的农杆菌。

9.一种如权利要求1所述的烟草花叶病毒基因片段，或者权利要求2-4任一所述的抗烟草花叶病毒的弱毒疫苗在防治烟草花叶病毒强毒株系侵染植物方面的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的植物为双子叶植物。

11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的植物为烟草。