[发明专利]一种检测RYR1基因多态性的多重基因检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于检测RYR1基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，包括同步扩增35个SNP位点及内参的4管引物组合物，PCR反应液、4管阳性对照液和无核酸酶水，所述同步扩增35个SNP位点及内参的4管引物组合物详见表1.1～1.4所示；其中，引物组合物PrimerMix A包含了A组9个SNP位点不同基因型的正反向扩增引物及4个内参的正反向扩增引物；引物组合物Primer Mix B包含了B组9个SNP位点不同基因型的正反向扩增引物及4个内参的正反向扩增引物；引物组合物Primer Mix C包含了C组10个SNP位点不同基因型的正反向扩增引物及4个内参的正反向扩增引物；引物组合物Primer Mix D包含了D组7个SNP位点不同基因型的正反向扩增引物及4个内参的正反向扩增引物；

表1.1 A组SNP位点及内参的引物组合物

表1.2 B组SNP位点及内参的引物组合物

表1.3 C组SNP位点及内参的引物组合物

表1.4 D组SNP位点及内参的引物组合物

2.如权利要求1所述的一种用于检测RYR1基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，因SNP位点只有1个碱基突变，故针对每一个SNP位点设计了3条引物，其中2条引物分别与野生型基因和突变型基因互补结合，1条共用的引物与另一段的野生型和突变型引物分别扩增出片段长短有2～10个碱基差异的片段。

3.如权利要求1所述的一种用于检测RYR1基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，在多重PCR反应中加入3个人类基因组(huDNA)内参和一个PCR反应内参(pcDNA)。

4.如权利要求1所述的一种用于检测RYR1基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括四管阳性对照液(POS A、POS B、POS C、POS D)，其中POS A为组别A所包含的SNP位点和内参基因所对应的质粒混合物；POS B为组别B所包含的SNP位点和内参基因所对应的质粒混合物；POS C为组别C所包含的SNP位点和内参基因所对应的质粒混合物；POS D为组别D所包含的SNP位点和内参基因所对应的质粒混合物。

5.如权利要求1所述的一种用于检测RYR1基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用的PCR反应液由以下组分组成：无核酸酶水、2×PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTP。