[发明专利]一种硫酸多粘菌素B的制备方法

说明书

本发明提供一种硫酸多粘菌素B的制备方法，其至少包括以下步骤：(1)多粘菌素B种子制备；(2)发酵；(3)精制；其将发酵液中可能影响成品质量的单杂控制到低于1.5％的水平，同时结合有效的精制方法使经该发酵液提取获得的成品质量符合EP8.0及CP2015的标准。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体地，本发明涉及一种硫酸多粘菌素B的制备方法。

背景技术

硫酸多粘菌素B(Polymyxin B sulfate)，又称硫酸粘杆菌素B，是一种多肽抗生素，几乎对所有革兰氏阴性菌均有较强的抑制或杀菌作用，如大肠杆菌、绿脓杆菌、副大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌、嗜酸杆菌、百日咳杆菌及痢疾杆菌等,尤其对绿脓杆菌有显著作用。世界上许多国家己批准该药作为饲料添加剂使用。硫酸多粘菌素B还作为药品使用，临床上主要用于敏感菌引起的感染及绿脓杆菌引起的泌尿系统感染、脑膜炎、败血症、烧伤感染以及皮肤粘膜感染等。

硫酸多粘菌素B在国内的生产企业仍然是为数不多的，而且国内还没有取得该原料药生产批文的企业，主要还是依赖从国外进口来满足需求，因此，在我国加快开发生产这种市场前景极好的产品已成为当务之急，多粘菌素类原料药的开发被列入优先扶持计划。其中，对于多粘菌素B发酵产物有关物质的控制是一个难点，中国药典中对于多粘菌素B有关物质的规定，任一单杂不得过3.0％，总杂不得过17.0％，如何有效控制发酵的杂质同时兼顾发酵产量是亟需要解决的问题。

因此，针对上述问题，本发明提供一种硫酸多粘菌素B的制备方法，将发酵液中可能影响成品质量的最大单杂控制到低于1.5％的水平，同时结合有效的精制方法使经该发酵液提取获得的成品质量符合EP8.0及CP2015的标准。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种硫酸多粘菌素B的制备方法，其至少包括以下步骤：

(1)多粘菌素B种子制备：将产多粘菌素B菌种置于培养基A中进行复苏培养，然后置于培养基B中进行摇床培养，得到活化的产多粘菌素B菌种；

(2)发酵：将步骤(1)得到的活化的产多粘菌素B菌种加入至培养罐C中，种子罐培养；然后置于培养罐D中，进行发酵罐培养，得到多粘菌素B菌种的发酵液；

(3)精制：对步骤(2)得到的多粘菌素B菌种的发酵液进行过滤、离子交换树脂处理、大孔树脂处理、解吸液碱结晶、转盐、脱色、纳滤浓缩、真空冷冻干燥，得到硫酸多粘菌素B。

在一种实施方式中，所述步骤(1)中所述培养基A中每100ml培养基含有以下组份：蔗糖1-3g、蛋白胨1-5g、磷酸氢二钾0.1-0.5g、七水硫酸镁0.2-1g、琼脂1-3g、余量为水。

在一种实施方式中，所述步骤(1)中所述培养基B中每100ml培养基含有以下组份：小麦粉7-10g、淀粉酶0.002-0.01g、酵母粉0.2-0.6g、碳酸钙0.1-0.5g、磷酸氢二钠0.01-0.03g、硫酸铵0.2-0.7g、余量为水。

在一种实施方式中，所述步骤(2)中所述培养罐C中每100ml培养基含有以下组份：小麦粉7-10g、淀粉酶0.002-0.01g、酵母粉0.2-0.6g、碳酸钙0.1-0.5g、磷酸氢二钠0.01-0.03g、硫酸铵0.2-0.7g、消泡剂0.01-0.05g、余量为水。

在一种实施方式中，所述步骤(2)中所述培养罐D中每100ml培养基含有以下组份：小麦粉10-15g、淀粉酶0.002-0.01g、酵母粉0.5-1g、碳酸钙0.1-0.5g、磷酸氢二钠0.01-0.03g、硫酸铵0.2-0.7g、消泡剂0.01-0.05g、L-苏氨酸0.01-0.1g、余量为水。

在一种实施方式中，所述步骤(2)中发酵罐培养过程中还包括补料过程，所述补料配方中每100ml培养基含有以下组份：L-苏氨酸0.01-0.1g、硫酸铵0.1-0.5g、余量为水。