[发明专利]一种用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸分离与纯化试剂，DNA亚硫酸盐转化试剂，KRAS基因突变检测试剂，SDC2和SFRP2基因甲基化检测试剂，粪便隐血检测试剂；其中核酸分离与纯化试剂用于分离及纯化出粪便样本中的人源DNA；DNA亚硫酸盐转化试剂用于将纯化的人源DNA进行亚硫酸盐转化，用于后续SDC2和SFRP2基因甲基化的检测。

2.根据权利要求1所述的用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒，其特征在于，所述KRAS基因突变检测试剂中包含能够检测KRAS基因7种突变型的试剂；检测试剂含预混试剂、水，以及KRAS基因7种突变形式和内参基因(ACTB)的引物和探针。

3.根据权利要求1所述的用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒，其特征在于，所述SDC2和SFRP2基因甲基化检测试剂中包含预混试剂、水，以及两个基因和内参基因(GAPDH)的引物和探针，其序列分别为：

SDC2正向引物：AATAAGTGAGAGGGCGTCGC

SDC2反向引物：AAACTCGAACTCGAAACTCG

SDC2探针：AACGCTCGCTTCCTCCTCCTACGC

SFRP2正向引物：CGCGTTTTAGTCGTCGGTTGTTA

SFRP2反向引物：AACGAAACGACCGAAATTCGAA

SFRP2探针：TATCCCGAACCCGCTCTCTTCGCTA

GAPDH正向引物：GGAGGTAATTAGGATGGTGTGGTT

GAPDH反向引物：CATCRCCCCACTTAATTTTAAAAA

GAPDH探针：TGGGTATATGGTAATTTTGT。

4.根据权利要求1所述的用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒，其特征在于，所述粪便隐血检测试剂包含能够定量检测粪便中血红蛋白水平的试剂。

5.权利要求1-4任意一项所述的用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

1)粪便样本采集和处理，采集用于基因检测和粪便隐血检测的样本；

2)粪便样本的DNA提取，采用核酸分离与纯化试剂，通过磁珠法分离及纯化出粪便样本中的人源DNA；

3)分离纯化后的人源DNA，一部分使用KRAS基因突变检测试剂检测KRAS基因突变，另一部分使用DNA亚硫酸盐转化试剂进行重亚硫酸盐转化，然后使用SDC2和SFRP2基因甲基化检测试剂检测SDC2和SFRP2基因甲基化水平；

4)粪便隐血检测，使用双抗体夹心CLIA法通过粪便隐血检测试剂对粪便样本的血红蛋白进行定量检测。

6.根据权利要求5所述的用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒的使用方法，其特征在于，根据各种肿瘤标志物的水平，采用逻辑回归模型，综合判定受检样本的结果，评估受检者是否患结直肠癌或癌前病变；逻辑回归模型中，受检样本属于低风险的概率为p，属于高风险的概率为1-p，所述逻辑运算公式为：

log(p/(1-p))＝a*△Ct1+b*△Ct2+c*△Ct3+d*FOBT+X

上式中，a，b，c，d，X为常数；△Ct1为KRAS突变和内参基因Ct值差值；△Ct2为SDC2甲基化和内参基因Ct值差值；△Ct3为SFRP2甲基化和内参基因Ct值差值；FOBT为血红蛋白测定值；所述a，b，c，d，X通过大量临床测试数据分布确定；当等式右侧大于0时，等式左侧p大于0.5，受检样本为低风险，当等式右侧小于0时，等式左侧p小于0.5，受检样本为高风险。

7.根据权利要求6所述的用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述低风险为非腺瘤性息肉，慢性结肠炎或正常；所述高风险为结直肠癌或腺瘤性息肉。