[发明专利]一种青牛胆组培快繁方法

说明书

本发明公开了一种青牛胆组培快繁方法，包括(1)外植体选择、(2)外植体消毒、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)丛生芽生根系列步骤。本发明建立了高效低成本的青牛胆组培快繁体系，使青牛胆规模化种植成为可能。

技术领域

本发明涉及中药材组培技术领域，尤其涉及一种青牛胆组培快繁方法。

背景技术

青牛胆(Tinospora sagittata(Oliv.)Gagnep.)为防己科青牛胆属植物，以块根入药，药材名金果榄，有清热解毒，利咽，止痛的功效，主要用于咽喉肿痛，痈疽疗毒，泄泻，痢疾，脘腹疼痛。主要分布于湖北、四川、西藏、贵州、云南、湖南、江西、福建、广西。

以青牛胆为植物基源的药材金果榄属于冷背药材，但近年来，随着用途的研究开发与应用，金果榄药材需求突飞猛增，而有限的野生资源不能满足市场需求，其价格亦随之迅猛上涨，各企事业单位纷纷开展青牛胆的种植技术研究，但由于青牛胆种子量少、种子发芽率低、发芽周期长，使得传统的种子繁殖繁殖率低，不能满足规模化种植需求，部分企事业单位在扦插、压条繁殖上虽然取得突破，但均存在繁殖率极低、生长缓慢的困境。近年来有单位开始金果榄的组培技术研究并获得成功，但在青牛胆的组培快繁技术研究方面，未见报道。

发明内容

本发明针对以上所述现有技术的不足，发明了一种成本低、操作简便、生产周期短的青牛胆组培快繁技术，可为规模化种植短期内快速提供优质种苗的繁育方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)外植体选择、(2)外植体消毒、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)丛生芽生根；

优选地，所述的外植体选择包含以下步骤：选择健壮植株栽植于室内，每隔7天用75％多菌灵500倍液喷施3-5次，选取幼嫩茎段；更加优选地，所述的幼嫩茎段为端部20～30cm的茎段；

优选地，所述的外植体消毒包含以下步骤：将选取的外植体用饱和肥皂水溶液涮洗后冲淋，在超净工作台上依次用酒精、漂白粉溶液及升汞溶液消毒；更加优选地，所述的外植体消毒包含以下步骤：使用75％酒精消毒30～40s，饱和漂白粉溶液消毒30～40min，0.1％升汞溶液+吐温-80消毒10～15min；

优选地，所述的丛生芽诱导包含以下步骤：将消毒好的外植体，剪去两端伤口，切成带单芽茎段，接种在诱导培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；更加优选地，所述的诱导培养基为WPM+IAA 0.01～0.1mg/L+KT 2.0～3.0mg/L+TDZ 0.05～0.2mg/L+性炭0.5g/L，培养温度为23～27℃，以光照强度1000～2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；

优选地，所述的丛生芽增殖包含以下步骤：将诱导出的丛生芽切成单芽，接种在增殖培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；更加优选地，所述的增殖培养基为MS+NAA 0.01～0.1mg/L+KT 2.0～3.0mg/L+TIBA 1.0～2.0mg/L+硝酸银1.0μg/L+椰汁50～100ml/L，培养温度为23～27℃，以光照强度1000～2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；

优选地，所述的丛生芽生根包含以下步骤：将增殖获得的丛生芽分成单芽，接种在生根培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；更加优选地，所述的生根培养基为1/2MS+IBA 1.0～2.0mg/L+椰汁50～100ml/L+活性炭0.5g/L，培养温度为23～27℃，以光照强度3000～4000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；

本发明还提供用于青牛胆组培快繁方法的培养基，所述培养基用于丛生芽诱导，所述培养基包含以下成分：WPM+IAA 0.01～0.1mg/L+KT 2.0～3.0mg/L+TDZ 0.05～0.2mg/L+性炭0.5g/L；