[发明专利]一种基于蛋白质组学鉴别古代毛织品残片毛种类的方法

说明书

本发明涉及文物检测领域，公开了一种基于蛋白质组学鉴别古代毛织品残片毛种类的方法，具体为：取等量已经混淆的古代山羊毛、绵羊毛、骆驼毛织品样品，用金属盐法和还原法提取角蛋白，分别进行SDS‑PAGE凝胶电泳分离蛋白，用反相微乳液法制备碳量子点溶液作为染色液。将条带酶解，采用HPLC‑MS/MS质谱分析，根据质谱检测得到的氨基酸序列与氨基酸序列数据库对比，鉴定古代毛织品属于山羊毛、绵羊毛还是骆驼毛。这种古代毛织品的检测方法具有凝胶电泳图像清晰，溶解率和提取效率高等优点，非常适合用于年代早、肉眼难以识别的古代毛织品残片不同目科属种的毛种类的鉴定。

技术领域

本发明涉及文物检测领域，更具体的说是涉及尤一种基于蛋白质组学鉴别古代毛织品残片毛种类的方法。

背景技术

四千年前的商朝，居住在西部地区的少数民族，通过进献，使一种称为“纰罽”的毛织品，传入中原地区，从此中原地区开始有了毛织物。这些毛织品的成分包括羊毛、骆驼毛、牛毛、兔毛等。

从中国早期的墓葬中出土有大量的毛制品，其数量，还是织造之精美程度都让人叹为观止。我国古代少数民族人民用创造性的劳动，生产出具有民族特色的毛织品。在各族人民经济、文化交流当中，毛织品成为中原汉族与边疆少数民族友好往来的媒介物，是各族人民团结的象征。

通过研究这些出土的毛织品的毛种类，可以帮助我们更加细致地了解古代毛织品的起源和少数民族服饰、民族间文化交流的历史，还原那个年代的社会风貌。但是这些动物毛及毛制品的主要成分是蛋白质，长期埋藏在地下环境中，受到水、热、氧气、微生物等环境因素的影响，角蛋白会发生变性和老化降解。而出土后因环境条件的剧烈变化，进一步加速了纤维的老化，因此，不难想象，在漫长的历史长河中，当年埋入墓葬或者遗址中的毛织品早已经失去原有的形貌，降解成肽段或者氨基酸，肉眼无法识别，且年代越早的证据越难寻觅，给毛类文物的鉴定和保护研究带来了很大的困难。并且，对于这些肉眼难以辨别的古代毛织品残片，想要分清楚它的毛种类更是难上加难。

目前，普通的分析检测技术，如傅里叶红外光谱，拉曼光谱，X-衍射分析等，在遇到这种残留物分析时，往往束手无策，国内外对于古代毛织品的鉴定，大多数还停留在对纤维形态的分析上，难以实现对于不同种动物毛的准确鉴定，而对于不同目的动物毛更是无计可施；因此，寻找一种更为科学简便的手段来鉴定古代毛织品残片的毛种类是非常必要的。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于蛋白质组学鉴别古代毛织品残片毛种类的方法。本发明的提取方法操作简单，能耗较小，溶解率和提取效率高，凝胶电泳选取的染色液灵敏，大大增加了电泳的分辨率。

一种基于蛋白质组学鉴别古代毛织品残片毛种类的方法，以g和mL计，包括如下步骤：

1）称取等量已混淆的古代山羊毛、绵羊毛、骆驼毛织品，用去离子水反复清洗，去除表面污渍， 30-35℃真空烘干，分别记为A、B、C三组。

2）将步骤1）烘干的A、B、C三组样品，分别浸没在pH =1.5-2.5的草酸溶液中，静置1-2h，用去离子水搓洗至中性，30-35℃真空烘干。

3）将步骤2）烘干的A、B、C三组样品，以1：15-25的浴比加入含有0.05-0.15mol/LLiBr和0.02-0.04mol/L 十二烷基硫酸钠的溶液中浸没，调节pH值到8-11，40-50℃下以190-210W的功率超声30-50min后，放入微波反应器辐射水解6-8min。

十二烷基硫酸钠能够与角蛋白形成巨大的胶束，进而保护生成的-SH被氧化，利于还原反应的发生，防止沉淀，同时由于十二烷基硫酸钠溶液有很大的表面能，从而使毛能与还原剂充分接触，使反应时间有效的减少。可以得到分子量高、浓度高的角蛋白溶液。

金属盐LiBr对毛分子中的氢键有极大的破坏作用，与还原性物质共同作用，可以溶解毛提取角蛋白。相较于其他金属盐，LiBr具有更好的溶解率和提取率。