[发明专利]一种分析羊毛角蛋白中氨基酸键合折叠分布的方法

权利要求书

1.一种分析羊毛角蛋白中氨基酸键合折叠分布的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）称取羊毛作为样品，用去离子水反复搓洗，去除表面杂质，烘干；

2）将烘干的样品在50-60℃下，以1:95-105的浴比在含有0.06-0.08wt%十二烷醇聚氧乙烯醚和0.2-0.4wt%硫酸钠的混合溶液中煮25-35min，洗除油脂、杂质，重复一次；

3）洗除油脂之后，将样品用去离子水冲洗干净，在40-50℃干燥，得到烘干的羊毛；

4）将步骤3）烘干的羊毛分成A1、A2、B1、B2、C1、C2、D、E、F1、F2、G和H等质量份的12组，其中A1组作为对照组，不做任何处理；将A2放入三口烧瓶中，在45-55℃下，以1:18-22的浴比在pH=4-6的0.7-0.8mol/L 三(2-羧乙基)膦中，通氮气搅拌反应25-35min，然后在40-50℃下，以1:18-20的浴比在2-4owf%乙撑亚胺中反应25-35min；

5）将B1、B2、C1、C2、D和E组浸入到胃蛋白酶溶液中进行酶解，反应完成后，对酶进行灭活处理，保留B1组残余羊毛；将B2放入三口烧瓶中，在45-55℃下，以1:18-22的浴比在pH=4-6的0.7-0.8mol/L 三(2-羧乙基)膦中，通氮气搅拌反应25-35min，然后在40-50℃下，以1:18-20的浴比在2-4owf%乙撑亚胺中反应25-35min；

6）将步骤5）酶解过的C1、C2、D和E组浸入到菠萝蛋白酶溶液中进行酶解，反应完成后，对酶进行灭活处理，保留C1组残余羊毛；将C2放入三口烧瓶中，在45-55℃下，以1:18-22的浴比在pH=4-6的0.7-0.8mol/L 三(2-羧乙基)膦中，通氮气搅拌反应25-35min，然后在40-50℃下，以1:18-20的浴比在2-4owf%乙撑亚胺中反应25-35min；

7）将步骤6）酶解过的D和E组浸入到胰蛋白酶溶液中进行酶解，反应完成后，对酶进行灭活处理，保留D组残余羊毛；

8）将步骤7）酶解过的E组浸入到葡萄球菌蛋白酶溶液中进行酶解，反应完成后，对酶进行灭活处理；

9）将F1、F2、G和H组浸入到菠萝蛋白酶溶液中进行酶解，反应完成后，对酶进行灭活处理，保留F1组残余羊毛；将F2放入三口烧瓶中，在45-55℃下，以1:18-22的浴比在pH=4-6的0.7-0.8mol/L 三(2-羧乙基)膦中，通氮气搅拌反应25-35min，然后在40-50℃下，以1:18-20的浴比在2-4owf%乙撑亚胺中反应25-35min；

10）将步骤9）酶解过的G、H组浸入到葡萄球菌蛋白酶溶液中进行酶解，反应完成后，对酶进行灭活处理，保留G组残余羊毛；

11）将步骤10）酶解过的H组浸入到胰蛋白酶溶液中进行酶解，反应完成后，对酶进行灭活处理；

12）对B1、B2、C1、C2、D、E、F1、F2、G和H组酶解后所得残余羊毛进行过滤和洗涤处理，得到在径向上具有不同程度溶蚀的残余羊毛；

13）利用全自动氨基酸分析仪对以上各组残余羊毛进行氨基酸分析，对比A1、B1、C1、D、E、F1、G和H组，分析羊毛角蛋白中氨基酸的径向分布；

14）在分析出羊毛角蛋白中氨基酸的径向分布的前提下，对比A1和A2、B1和B2、C1和C2、F1和F2，分析羊毛角蛋白中氨基酸的键合折叠分布。

2.如权利要求1所述的一种分析羊毛角蛋白中氨基酸键合折叠分布的方法，其特征在于，步骤5）中，酶解反应具体为：将B1、B2、C1、C2、D和E组以1:38-42的浴比放入预先配制好的1-2g/L的胃蛋白酶溶液中，控制反应温度35-40℃，溶液pH= 3-4，反应5-7h；反应完成后，对酶进行灭活处理，保留B1组残余羊毛。

3.如权利要求1所述的一种分析羊毛角蛋白中氨基酸键合折叠分布的方法，其特征在于，步骤6）和步骤9）中，酶解反应具体为：将步骤5）酶解过的C1、C2、D和E组，以及F1、F2、G和H组以1:38-42的浴比放入预先配制好的1-2g/L的菠萝蛋白酶溶液中，控制反应温度50-60℃，溶液pH= 5-6.5，反应5-7h；反应完成后，对酶进行灭活处理，保留C1和F1组残余羊毛。