[发明专利]用于检测皮炎芽生菌的引物探针组及其应用

说明书

一种用于检测皮炎芽生菌的引物探针组与TaqMan Real‑time PCR检测方法。以皮炎芽生菌的BAD1基因作为目标基因，该序列高度保守，PCR容易扩增，根据TaqMan实时荧光PCR的基本原理，针对皮炎芽生菌的BAD1基因为靶基因的特异性区域，结合其它基因的相关信息，设计2条特异性引物和1条探针，建立一种简便、高效、实用的DNA检测方法，样本中提取的微量基因组DNA即可作为模板进行鉴定，该方法可用于皮炎芽生菌的快速检测，应用前景广阔，可以准确、快速的判断被检测样本是否含有了皮炎芽生菌。

技术领域

本发明涉及一种用于检测皮炎芽生菌的引物探针组与TaqMan Real-time PCR检测方法。

背景技术

芽生菌病是由皮炎芽生菌引起的一种慢性真菌病。特征是在肺和皮肤等多组织器官形成肉芽肿、脓肿及溃疡。本病为人畜共患病，最常见于人和犬。主要通过吸入腐生真菌孢子经呼吸道感染，也可经皮肤伤口感染。幼年犬和儿童对本病敏感。

皮炎芽生菌典型表现：1、原发性肺皮炎：芽生菌病吸入孢子进入肺泡后被巨噬细胞吞噬，导致炎症反应包括多形核白细胞浸林润，然后构成肉芽肿，均可表现为化脓性或化脓性肉芽肿性林病变，在肺巨噬细胞内可见芽生菌酵母细胞，有肺炎实质性浸林润，淋巴管炎及淋巴结炎。2、肌肤型皮炎：芽生菌病好发于露出部位如颜面，手，腕，下肢或肌肤黏林膜接壤区如口，咽，舌等处，也可坐落非露出部位，数周至数月后开展成溃疡性疣状肉芽肿，边际高起1～3cm，界限明白，结有紫色痂，常误诊为基底细胞癌，但边际常有微脓肿，溃疡纤维化后构成瘢痕，溃疡中心活检常查不到菌而在活动边际才可查到。3、播散性皮炎：芽生菌病多数从肺，少量从别的部位经过血液循环播散至骨骼，脑等部位，消化道则很少累及，脊椎，肋骨，胫骨和股骨常累及，表现为骨髓炎，骨膜炎乃至化脓性关节炎，有痛苦和功能障碍，脑脓肿和脑膜炎，肝脾化脓性肉芽肿及前列腺炎等也常有发作。

Real-time PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR过程，与常规PCR相比，具有特异性更强、敏感性更高、有效解决PCR污染、自动化程度高等特点。因其需要的取样量少、快速简便等优点，实时荧光PCR检测技术已广泛应用于病原体检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测皮炎芽生菌的TaqMan Real-time PCR引物探针组与TaqMan Real-time PCR检测方法。

本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成：

引物F：5'- ATTCAAGACAACAGAGCC -3'；

引物R：5'- GCAACTTGGATAATGCGT -3'；

探针P：5'-FAM- CAGGCGAAATCGAGAATCGG -BHQ1-3'。

引物为单链DNA分子，探针P为5’末端具有FAM荧光基团且3’末端具有BHQ1荧光淬灭基团的单链DNA分子。

本发明还保护一种用于检测皮炎芽生菌的TaqMan Real-time PCR检测方法，包括反应体系配比和荧光定量PCR反应程序。