[发明专利]小麦HsfA2亚族基因在拟南芥中耐热性的鉴定方法

说明书

本发明涉及一种小麦HsfA2亚族基因在拟南芥中（Arabidopsis thaliana L.,生态型为Columbia）耐热性的鉴定方法，其包括如下步骤：（A）利用重组的方法将小麦HsfA2亚族基因构建到双元表达载体pCAMBIA1300上；（B）将双元表达载体pCAMBIA1300转化到农杆菌GV3101上；（C）将农杆菌GV3101分别侵染拟南芥野生型和步骤（A）所述小麦HsfA2亚族基因的缺失突变体植株，培养至所述拟南芥植株成熟后，收获种子；（D）筛选得到拟南芥过表达阳性纯合体植株以及拟南芥缺失突变体阳性纯合体植株；进行基础耐热性、获得耐热性及恢复耐热性鉴定。本发明稳定性高、准确性好，同时适合于所有作物HsfA2亚族基因转入拟南芥后纯合株系的耐热性鉴定。

技术领域

本发明属于通过转基因后代植株进行基因功能鉴定相关技术领域。具体为遗传转化小麦A2亚族热激转录因子基因的拟南芥后代纯合植株的基础耐热性、获得耐热性以及突变体恢复耐热性鉴定方法。

背景技术

随着全球温室效应的加剧，气候变暖已经成为现代农业生产体系所面临的严峻挑战。小麦作为世界范围内一种重要的作物，其产量越来越受到全球变暖的不利影响，我国温带小麦在生育期间经常遭受干热风危害，导致小麦产量和品质均不同程度降低，一般年份造成小麦减产5-10%，偏重年份达 30%。因此，提高小麦耐热性，创制小麦耐热新种质、培育耐热性强的品种是降低高温胁迫危害的关键。现代分子生物学和基因工程相关技术的发展，使人们在分子水平上揭示植物对高温胁迫响应和诱导相关信号传导途径成为可能，同时为通过基因工程手段提高作物耐热胁迫能力成为现实。而解析小麦高温胁迫响应的分子机制、挖掘优异的抗逆基因是关键。

由于植物的不可移动性，导致其持续的暴露在热胁迫环境当中。为了适应这种长期的胁迫环境，植物进化出一套应对胁迫的响应网络。热激转录因子（Hsf）是热胁迫传导链的末端调控元件，能够通过激活热胁迫和其它胁迫响应基因的表达从而提高植物耐热性，是优异的作物品种改良基因资源。

自酵母Hsf首先被发现以来，模式植物拟南芥和番茄Hsf家族得以重点研究，近年来，多种作物的Hsf家族基因被生物信息学推测和报道。不同作物家族基因数量不等，拟南芥和番茄分别有21个和24个Hsfs，大田作物Hsf家族基因数目多，玉米有30个，小麦热激转录因子家族至少有56个小麦Hsfs被识别。研究表明，Hsf家族包括A、B和C家族，不同家族细分多个亚族，每个亚族又包括不同的基因成员。A2亚族基因不仅参与植株基础耐热性调控，与植物的获得耐热性密切相关，在热胁迫后期及恢复阶段起重要的调控作用。

因此，在HsfA2基因克隆和特性研究的基础上进行深入的功能鉴定，是功能基因研究的重要环节，目前主要通过在拟南芥中遗传转化来进行初步的功能鉴定。前人对耐热基因研究相对较少，基因的耐热性鉴定缺乏成熟的技术体系。加之，热胁迫处理受多种外界因素影响，稳定性差，不同拟南芥植株生长环境、苗龄、热胁迫位置等均影响鉴定结果的准确性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定性和准确性好的小麦HsfA2亚族基因在拟南芥中耐热性的鉴定方法。

本发明采用如下技术方案：

一种小麦HsfA2亚族基因在拟南芥中耐热性的鉴定方法，其包括如下步骤：

（A）利用重组的方法将小麦HsfA2亚族基因构建到双元表达载体pCAMBIA1300上；

（B）制备农杆菌GV3101感受态细胞，将步骤（A）得到的双元表达载体pCAMBIA1300转化到农杆菌GV3101上；