[发明专利]一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法在审

专利信息
申请号: 201810978721.8 申请日: 2018-08-27
公开(公告)号: CN108864179A 公开(公告)日: 2018-11-23
发明(设计)人: 孙娜;陈晋;林松毅;鲍志杰;李冬梅;沈佳颖 申请(专利权)人: 大连工业大学
主分类号: C07F9/10 分类号: C07F9/10
代理公司: 大连格智知识产权代理有限公司 21238 代理人: 刘琦
地址: 116034 辽宁省大*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要:
搜索关键词: 蛋黄磷脂酰胆碱 低压柱层析 梯度洗脱 氯仿 制备 三元混合溶剂 旋转蒸发浓缩 功能性食品 磷脂酰胆碱 磷脂 薄层色谱 操作过程 工业领域 混合溶液 生产效率 洗脱过程 有机溶剂 再生处理 蛋黄 冰乙酸 粗磷脂 氮吹仪 固定相 深加工 洗脱剂 硅胶 甲醇 洗脱 化妆品 并用 回收 监测
【权利要求书】:

1.一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1、填料活化:取200~300目的混合硅胶粉加热活化;

S2、装柱:向步骤S1活化后的硅胶粉中加入氯仿,搅拌成浆状,湿法装入玻璃层析柱中,制得硅胶柱;

S3、上样:取蛋黄粗磷脂,用氯仿充分溶解得样品溶液,将所述的样品溶液沿柱壁加入步骤S2制备的硅胶柱中;

S4、梯度洗脱:当步骤S3中所述的样品溶液流至硅胶面时,用10~20倍柱体积、体积比为18:5:1~17:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液进行第一次洗脱;之后用30~50倍柱体积、积比为16:5:1~10:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸体三元混合液进行第二次洗脱,收集第二次洗脱的洗脱液。

S5、薄层色谱检测:对步骤S4收集到的洗脱液用薄层色谱进行检测,测定洗脱液中组分是否为目标组分,所述目标组分为:薄层色谱检测中出现单一斑点,且与磷脂酰胆碱标准品有同一迁移率的组分;

S6、样品浓缩:把步骤S5所述含有目标组分的洗脱液收集在一起,浓缩成膏状,干燥,得到蛋黄磷脂酰胆碱,所述蛋黄磷脂酰胆碱纯度为90~98%。

2.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,步骤S1所述加热活化为:50~60℃,4~6h。

3.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,步骤S2所述的玻璃层析柱的直径和柱长比为(2~5):25。

4.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,步骤S3所述蛋黄粗磷脂,添加量为10~20mg/g硅胶粉。

5.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,步骤S3所述蛋黄粗磷脂与氯仿的料液比为150~300:1mg/mL。

6.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,步骤S3所述蛋黄粗磷脂中,磷脂酰胆碱的含量大于60%,磷脂酰乙醇胺的含量大于16%。

7.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,步骤S5所述的薄层色谱检测具体为,每收集0.25倍柱体积洗脱液用薄层色谱检测一次,用体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液作为展开剂进行展开。

8.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1、填料活化:称取15g、目数为200~300的混合硅胶粉,在50℃的烘箱里活化6h;

S2、装柱:选择长为200mm,直径为16mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱进行分离纯化,向步骤S1活化后的硅胶粉中加入30mL氯仿搅拌成浆状,采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中,得硅胶柱;

S3、将200mg的蛋黄粗磷脂用1mL氯仿溶解后沿柱壁加入步骤S2制备的硅胶层析柱内;

S4、梯度洗脱:先用20倍柱体积、体积比为18:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液进行第一次洗脱;再用50倍柱体积、体积比为16:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液为进行第二次洗脱,收集第二次洗脱的洗脱液;

S5、薄层色谱检测:将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成,每收集10mL鉴定一次,进行薄层色谱展开时,展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液,层析完毕后,取出薄板,干燥,放入碘缸内盖好,5min后有黄色斑点产生;如果薄层色谱检测中出现单一斑点,且与标准品磷脂酰胆碱具有同一迁移率,则判断所检测洗脱液中含有磷脂酰胆碱组分;

S6、样品浓缩:收集步骤S5鉴定为含有磷脂酰胆碱组分的洗脱液,旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥,得蛋黄磷脂酰胆碱;高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为98%。

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