[发明专利]一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法

权利要求书

1.一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、填料活化：取200～300目的混合硅胶粉加热活化；

S2、装柱：向步骤S1活化后的硅胶粉中加入氯仿，搅拌成浆状，湿法装入玻璃层析柱中，制得硅胶柱；

S3、上样：取蛋黄粗磷脂，用氯仿充分溶解得样品溶液，将所述的样品溶液沿柱壁加入步骤S2制备的硅胶柱中；

S4、梯度洗脱：当步骤S3中所述的样品溶液流至硅胶面时，用10～20倍柱体积、体积比为18:5:1～17:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液进行第一次洗脱；之后用30～50倍柱体积、积比为16:5:1～10:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸体三元混合液进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液。

S5、薄层色谱检测：对步骤S4收集到的洗脱液用薄层色谱进行检测，测定洗脱液中组分是否为目标组分，所述目标组分为：薄层色谱检测中出现单一斑点，且与磷脂酰胆碱标准品有同一迁移率的组分；

S6、样品浓缩：把步骤S5所述含有目标组分的洗脱液收集在一起，浓缩成膏状，干燥，得到蛋黄磷脂酰胆碱，所述蛋黄磷脂酰胆碱纯度为90～98％。

2.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S1所述加热活化为：50～60℃，4～6h。

3.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S2所述的玻璃层析柱的直径和柱长比为(2～5):25。

4.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S3所述蛋黄粗磷脂，添加量为10～20mg/g硅胶粉。

5.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S3所述蛋黄粗磷脂与氯仿的料液比为150～300:1mg/mL。

6.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S3所述蛋黄粗磷脂中，磷脂酰胆碱的含量大于60％，磷脂酰乙醇胺的含量大于16％。

7.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S5所述的薄层色谱检测具体为，每收集0.25倍柱体积洗脱液用薄层色谱检测一次，用体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液作为展开剂进行展开。

8.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、填料活化：称取15g、目数为200～300的混合硅胶粉，在50℃的烘箱里活化6h；

S2、装柱：选择长为200mm，直径为16mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入30mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；

S3、将200mg的蛋黄粗磷脂用1mL氯仿溶解后沿柱壁加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；

S4、梯度洗脱：先用20倍柱体积、体积比为18:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液进行第一次洗脱；再用50倍柱体积、体积比为16:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液为进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；

S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集10mL鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品磷脂酰胆碱具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有磷脂酰胆碱组分；

S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有磷脂酰胆碱组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱；高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为98％。