[发明专利]痛风差异表达基因检测与急性发作预警试剂盒

说明书

本发明公开了一种痛风差异表达基因检测与急性发作预警试剂盒，包括：与2种内参照基因ACTB、GAPDH及6种痛风性关节炎急性发作期差异表达基因IL1B、P2RX7、CXCL8、TLR2、TLR4、NLRP3的cDNA互补配对的特异性引物和探针SEQ ID NO.1‑93。本发明提供一个高灵敏度、高特异性的可以在2管荧光定量PCR反应中同时检测2种内参照基因(ACTB、GAPDH)和6种痛风性关节炎急性发作期差异表达基因(IL1B、P2RX7、CXCL8、TLR2、TLR4、NLRP3)的表达水平的方法以及基于此方法的痛风差异表达基因检测与急性发作预警试剂盒，本发明的试剂盒检测灵敏度高、特异性强、准确度高。

技术领域

本发明涉及应用于医学基础研究以及痛风性关节炎急性发作早期预警和临床诊断的分子生物学技术领域，特别涉及一种痛风差异表达基因检测与急性发作预警试剂盒。

背景技术

痛风(gout)是由单钠尿酸盐(MSU)沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关，特指急性特征性关节炎和慢性痛风石疾病，主要包括急性发作性关节炎、痛风石形成、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石，重者可出现关节残疾和肾功能不全，常伴腹型肥胖、高脂血症、高血压、2型糖尿病及心血管病等表现，目前已成为危害人类健康的常见病、多发病。

临床上痛风检查包括血尿酸测定、尿尿酸测定、尿酸盐检查、影像学检查、超声检查等，其中尿酸盐检查是当前不可替代的金标准：偏振光显微镜下表现为负性双折光的针状或杆状的单钠尿酸盐晶体，急性发作期，可见于关节滑液中白细胞内、外；也可见于在痛风石的抽吸物中；在发作间歇期，也可见于曾受累关节的滑液中。但该检测方法会带给患者创伤和较重的痛感，且关节滑液的穿刺吸取比较困难，所以需要敏感而特异性的无创性指标，从分子水平上提高对痛风的预警能力。

越来越多的证据显示，MSU晶体介导的炎症属于先天固有免疫反应范畴，主要涉及TLR4—NF-κB—IL-1β、NLRP3炎症体信号通路，已有的多组学研究表明，TLR2、TLR4、NLRP3、IL1B、P2RX7和CXCL8等炎症因子对于痛风炎症的发展至关重要，有可能作为预警痛风急性发作的生物标记物。

Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)为I型跨膜蛋白，主要特点是结构功能区富含亮氨酸重复序列(LRRs结构)，可介导对病原相关分子模式(PAMPs)/损伤相关分子模式(DAMPs)的识别，其与细胞外配体结合触发细胞活化和增生。研究显示缺乏TLR2或TLR4的小鼠骨髓源性巨噬细胞吞噬MSU晶体能力下降，释放的促炎性细胞因子IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)也减少，提示这些TLR受体在MSU诱导的炎症反应中必不可少。Toll样受体还可能通过调节IL-1β前体的合成发挥间接作用。

胞内的NLRs(NOD-like receptors，NOD样受体)同TLRs一样是固有免疫系统对病原体的重要感受器，广泛参与对病原体上PAMPs的识别，同时也可感知内源性DAMPs，产生相应的炎症应答反应。其典型代表NLRP3可识别并结合尿酸钠晶体、ATP、内毒素和细胞裂解产物等“危险信号”启动炎症反应。

白细胞介素1β(IL-1β)也被称为白细胞热原，白细胞内源性介质，单核细胞因子，淋巴细胞活化因子等，是固有免疫反应中起关键作用的前炎症因子，作为免疫和炎症反应的介质，参与许多生物过程。

P2RX7蛋白属于ATP的嘌呤受体家族，可作为模式识别受体参与细胞外ATP介导的凋亡细胞死亡、受体运输调节、肥大细胞脱颗粒和炎症。多个研究小组证实细胞外ATP是激活NLRP3炎性体的重要危险信号。一些研究还表明，细胞外ATP对NLRP3炎性体的激活需要嘌呤受体P2RX7与泛连接蛋白1(pannexin-1)通道的共同活化。