[发明专利]一种Tc1iPs细胞系及其构建方法

说明书

本发明公开了一种Tc1iPs细胞系及其构建方法。所述细胞系为采用Yamanaka四因子重编程方法将小鼠唐氏综合征小鼠的尾尖皮肤成纤维细胞制备成的细胞系。本发明建立的Tc1iPS细胞系，作为一种细胞模型，将有助于研究发育早期唐氏综合征的发生发展机制，以及在细胞水平进行相关治疗性研究，以推动胚胎早期唐氏综合症的干预性防治。

技术领域

本发明属于诱导性多能干细胞技术领域，具体涉及一种Tc1iPs细胞系及其构建方法。

背景技术

唐氏综合征患儿在出生时即已有明显的特殊面容，且常呈现嗜睡和喂养困难，其智能低下表现随年龄增长而逐渐明显，智商约25-50，动作发育和性发育都延迟，患儿眼距宽，鼻根低平，眼裂小，眼外侧上斜，有内眦赘皮，外耳小，舌胖，常伸出口外，流涎多，身材矮小，头围小于正常，头前，后径短，枕部平呈扁头，颈短，皮肤宽松，骨龄常落后于年龄，出牙延迟且常错位，头发细软而较少，发旋多居中，前囟闭合晚，顶枕中线可有第三囟门，四肢短，由于韧带松弛，关节可过度弯曲，手指粗短，小指中节骨发育不良使小指向内弯曲，指骨短，手掌三叉点向远端移位，常见通贯掌纹，草鞋足，拇趾球部约半数患儿呈弓型皮纹。患儿常伴有先天性心脏病等其他畸形，因免疫功能低下，易患各种感染，白血病的发生率比一般增高10-30倍，如存活至成人期，则常在30岁以后即出现老年性痴呆症状。

唐氏综合征致病原因是由于多了一条21号染色体，但致病机理和疾病的发生衍变并不十分清楚。iPS细胞可作为一种工具疾病细胞模型，用于研究疾病的病理学发生机制及用来进行治疗性研究。目前，尚没有一种可用于方便的研究唐氏综合征的iPS细胞系。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Tc1iPs细胞系及其构建方法。

一种Tc1iPs细胞系，所述细胞系为采用Yamanaka四因子重编程方法将小鼠唐氏综合征小鼠的尾尖皮肤成纤维细胞制备成的细胞系。

上述Tc1iPs细胞系的制备方法，按照如下步骤进行：

(1)制备Tc1小鼠尾尖皮肤成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞；

(2)制备KMSO质粒，并复苏和培养PlatE细胞；

(3)Oct3/4,Sox2,c-Myc,Klf4病毒包装；

(4)以小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层细胞，将KMSO质粒转染入Tc1小鼠尾尖皮肤成纤维细胞中。

所述Tc1小鼠尾尖皮肤成纤维细胞的制备方法如下：

(1)剪取Tc1小鼠0.5-1.5cm尾尖，浸泡于2％Pen/Step的PBS中；

(2)用手术刀刮去毛发后用眼科剪将其剪成组织块，将真皮层贴于直径是3.5cm的培养皿中，并用盖玻片轻压；

(3)滴加少许15％FBS的FP培养液，过夜后加入2ml FP培养液；

(4)每2天更换新鲜FP培养液，第8-12天用0.25％的胰酶消化后按1:3进行传代培养；

(5)等细胞长至95-100％汇合度时，用成纤维细胞冻存液冻存。

所述小鼠胚胎成纤维细胞的制备方法如下：

(1)颈椎脱臼处死怀孕13.5天的ICR孕鼠，75％酒精消毒小鼠，剖腹取子宫置于含2％P/S的PBS中；

(2)解剖显微镜下，将小鼠胚胎一个个分离出来，去头、去四肢、去尾、去内脏；

(3)将小鼠胚胎皮肤置于1.5ml EP管中，用眼科剪将其彻底剪碎；

(4)将组织转移到50ml离心管中，加入5-10ml 0.25％胰酶，用5ml吸管反复吹吸，将组织块消化成单细胞，用10％FP培养液中止消化；