[发明专利]亲和层析填料的筛选方法

权利要求书

1.一种亲和层析填料的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)确认各待测亲和层析填料对单克隆抗体的静态结合能力，初步筛选适合所述单克隆抗体的多种亲和层析填料，并将初步筛选的各亲和层析填料分别装到不同亲和层析柱中；

2)在相同的流速、保留时间下，将含有相同浓度的单克隆抗体的上样液分别连续上样到步骤1)的各亲和层析柱中并使其过载，并将每个亲和层析柱的流穿液按照穿透的先后顺序分装为多个待测液，每个所述亲和层析柱的多个待测液中，至少一个待测液的单克隆抗体的浓度与所述上样液中的单克隆抗体的浓度的比值处于0.05～0.15之间；

3)检测各个待测液中单克隆抗体的浓度；

4)根据每个待测液中单克隆抗体的浓度，确定各种亲和层析填料对单克隆抗体的动态结合能力，其中，在待测液中单克隆抗体的浓度与上样液中单克隆抗体的浓度的比值相同的条件下，上样总体积大的亲和层析填料的动态结合能力大，或者在相同的时间条件下，待测液中单克隆抗体浓度小的亲和填料的动态结合能力大；

5)根据动态结合能力选择用于分离所述单克隆抗体的亲和层析填料。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，加入到每个亲和层柱中的上样液的体积与该上样液中单克隆抗体的质量浓度之积大于亲和层析填料的固有载量与该亲和填料的体积之积。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤3)的具体步骤包括：

分别将各亲和层析填料装填到多孔过滤板上，用平衡液平衡各亲和层析填料，得到微孔层析板；

分别将各亲和层析柱的多个所述待测液等体积加到微孔层析板对应的孔中，得到多个待孵育液；

将各待孵育液孵育、离心洗脱，得到多个洗脱液；及

检测各洗脱液中单克隆抗体的浓度，得到各待测液中单克隆抗体的浓度。

4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述将各待孵育液孵育、离心洗脱，得到多个洗脱液的步骤包括：

将各待孵育液孵育、离心，得到多个离心液；

检测各个离心液中的单克隆抗体的浓度，若离心液中的单克隆抗体的浓度与上样液中单克隆抗体的浓度的比值大于5％，则将离心液再次加入至所述微孔层析板对应的孔中进行孵育，然后离心，检测单克隆抗体的浓度，直至每个离心液中的单克隆抗体的浓度与上样液中单克隆抗体的浓度的比值不大于5％，得到吸附有单克隆抗体的微孔层析板；及

用洗脱缓冲液清洗吸附有所述单克隆抗体的微孔层析板，得到多个洗脱液。

5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，确定各种待测亲和层析填料对单克隆抗体的动态结合能力的步骤包括：

计算每个待测液对应的上样总体积；及

计算每个待测液中单克隆抗体的浓度与上样液中单克隆抗体的浓度的比值，在相同的比值下，上样总体积大的亲和层析填料的动态结合能力大。

6.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述上样液为含有所述单克隆抗体的发酵液上清。

7.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述确认每种亲和层析填料对单克隆抗体的静态结合能力的步骤包括：

将所述单克隆抗体配制成不同浓度的上样样品；

分别将各所述亲和层析填料等体积装填到多孔过滤板上，用亲和层析平衡液平衡每种亲和层析填料，得到微孔层析板；

分别将不同浓度的上样样品等体积加到微孔层析板上，并进行孵育、离心、收集上清液，检测上清液中的单克隆抗体的浓度；及

根据每种亲和层析填料的上清液中的单克隆抗体浓度，确认每种亲和层析填料对所述单克隆抗体的静态结合能力。

8.根据权利要求7所述的筛选方法，其特征在于，采用梯度稀释法将所述单克隆抗体配制成不同浓度的上样样品。