[发明专利]亲和层析填料的筛选方法

说明书

本发明涉及一种亲和层析的填料的筛选方法，包括以下步骤：在相同的流速、保留时间下，将含有单克隆抗体的上样液分别连续上样到多个亲和层析柱中，使每个亲和层析柱过载，每个亲和层析柱中含有一种亲和层析填料，且至少有两个亲和层析柱中的亲和层析填料不同；将各个亲和层析柱的流穿液按照穿透的先后顺序分装为多个待测液；检测各个待测液中单克隆抗体的浓度；根据各待测液中单克隆抗体的浓度，确定各种亲和层析填料对单克隆抗体的动态结合能力，并根据动态结合能力筛选亲和层析填料。按照上述亲和层析的填料的筛选方法，能够快速筛选得到适合该单克隆抗体的亲和层析填料。

技术领域

本发明涉及生物领域，特别是涉及一种亲和层析填料的筛选方法。

背景技术

自第一个抗移植后免疫排斥反应的鼠源单克隆抗体muromonab-CD3(OKT3) 经美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准上市以来，单克隆抗体正越来越广泛地应用于治疗性制药领域。

在单克隆抗体的生产开发中，单克隆抗体纯化工艺的开发更是其中极其重要的一环。目前最普遍的平台化纯化技术为：将含有抗体的细胞培养液经过澄清处理、亲和层析、病毒灭活、离子交换层析中度纯化、离子交换层析精细纯化、除病毒过滤以及超滤浓缩及缓冲液置换，从而得到纯化的单克隆抗体。

在亲和层析工艺的开发过程中，如何快速高效地从品类繁多的层析填料中挑选出一至两种满足工艺需求的填料是富有挑战性的，主要涉及层析填料的动态吸附能力的评价。传统的筛选方法是通过设置不同的流速、保留时间，多次运行样品和层析介质的吸附/洗脱过程，通过利用蛋白纯化仪监测流穿中目标抗体的穿透位置及穿透的比例，拟合流穿曲线来确定。这种筛选方法的缺点是工艺时间长，材料及样品消耗量大。

发明内容

基于此，提供一种快速的亲和层析的填料的筛选方法。

一种亲和层析的填料的筛选方法，包括以下步骤：

在相同的流速、保留时间下，将含有单克隆抗体的上样液分别连续上样到多个亲和层析柱中，使每个所述亲和层析柱过载，其中，每个所述亲和层析柱中含有一种亲和层析填料，且至少有两个所述亲和层析柱中的亲和层析填料不同；

将各个所述亲和层析柱的流穿液按照穿透的先后顺序分装为多个待测液；

检测各个所述待测液中所述单克隆抗体的浓度；

根据所述待测液中所述单克隆抗体的浓度，确定各种亲和层析填料对所述单克隆抗体的动态结合能力；及

根据所述动态结合能力筛选所述亲和层析填料。

上述亲和层析的填料的筛选方法，将含有单克隆抗体的上样液分别连续上样到多个亲和层析柱中，使亲和层析柱过载，并按照穿透的先后顺序将流穿液分装为多个待测液，通过比较待测液中的单克隆抗体的浓度，能够快速分析每种亲和层析填料对该单克隆抗体的动态结合能力，从而筛选得到适合该单克隆抗体的亲和层析填料。另外，整个筛选过程中，一次连续上样就能评价一种亲和层析填料的结合能力，单克隆抗体的用量少，涉及的耗材用量少。

在其中一个实施例中，加入到每个所述亲和层柱中的所述上样液的体积与该上样液中所述单克隆抗体的质量浓度之积大于所述亲和层析填料的固有载量与该亲和填料的体积之积。

在其中一个实施例中，所述检测每个所述待测液中所述单克隆抗体的浓度的步骤包括：

分别将各所述亲和层析填料装填到多孔过滤板上，用平衡液平衡各所述亲和层析填料，得到微孔层析板；

分别将各所述亲和层析柱的多个所述待测液等体积加到所述微孔层析板对应的孔中，得到多个待孵育液；

将各所述待孵育液孵育、离心及洗脱，得到多个洗脱液；及