[发明专利]一种快速挖掘并测定白酒酿造过程中腺苷甲硫氨酸的方法

权利要求书

1.一种快速挖掘并测定白酒酿造过程中腺苷甲硫氨酸的方法，具体包括以下步骤：

(1)挖掘白酒酿造过程中腺苷甲硫氨酸的存在及其表达：

1)高通量测序：对待测样品白酒发酵产物用Illumina Mi Seq PE300 Illumina，California，USA进行高通量测序；

2)转录组测序：对白酒发酵产物提取RNA，并用Hiseq2000对RNA进行测序；

3)基因表达分析：使用软件Cufflinks对步骤2)测序后的RNA进行基因表达分析，确定白酒发酵过程中产生的对应风味物质腺苷甲硫氨酸的菌种；

(2)测定白酒酿造过程中的腺苷甲硫氨酸：

1)浸泡与超声提取：取5～10g白酒发酵产物，加入15～20ml的超纯水，浸泡10～30min后，超声提取2～3次，每次≥20min，12000rpm离心10～15min后取上清液备用；

2)固相萃取柱浓缩纯化：向oasis HLB萃取小柱加入2ml甲醇活化固相萃取柱，再加入1ml超纯水平衡萃取柱；加入步骤1)所得样品上清液，静置10min后加入2ml甲醇洗脱，再加入1ml流动相洗脱，并收集0.8ml处流出液；过0.22μm滤膜于液相小瓶中待LC-MS检测备用；

3)腺苷甲硫氨酸含量的测定：物质定性采用离子碎片进行分析比对，并以标准品作为对照；定量方法采用将待测物质丰度与标准品比对；

4)LC-MS检测：

a、仪器：Agilent 6520Accura te-Mass QTOF LC-MS，ESI+离子源AgilentTechnologies；

b、色谱柱：Kromasil C18 column，4.6×250mm；

c、液相条件：柱温：25～35℃；

d、流动相：A相：甲醇，B相：含有0.1％的甲酸的水，B相与A相体积比为95:5；

f、流速：0.8mL/min

g、进样量：10μl；

5)标准曲线的建立：

a、配制标准品母液：称取1mg腺苷甲硫氨酸物标准品，用超纯水配制成1mg/ml的标准品母液，随后梯度稀释成12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、125μg/ml标品溶液放置于4℃冰箱中保存备用；

b、绘制标准曲线：以腺苷甲硫氨酸标准品特征离子峰的峰面积作为纵坐标，以腺苷甲硫氨酸标准品稀释液浓度作为横坐标绘制标准曲线；

6)腺苷甲硫氨酸含量计算：通过步骤5)标准曲线计算白酒发酵产物中腺苷甲硫氨酸含量。

2.根据权利要求1所述的一种快速挖掘并测定白酒酿造过程中腺苷甲硫氨酸的方法，其特征在于：步骤(1)和(2)所述的白酒发酵产物为酒醅、酒糟或大曲。