[发明专利]一种检测牛诺如病毒和牛冠状病毒的引物组和双重RT-PCR方法有效
| 申请号： | 201810985249.0 | 申请日： | 2018-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN108913815B | 公开（公告）日： | 2021-12-10 |
| 发明（设计）人： | 师志海;兰亚莉;王文佳;王璟;施巧婷;徐照学 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 郑州明华专利代理事务所(普通合伙) 41162 | 代理人： | 王明朗 |
| 地址： | 450000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 牛诺如 病毒 冠状病毒 引物 双重 rt pcr 方法 | ||
1.一种检测牛诺如病毒和牛冠状病毒的双重RT-PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）引物合成：合成引物组，所述引物组由用于检测牛诺如病毒的引物和用于检测牛冠状病毒的引物组成；
（2）待测样品RNA提取、反转录：提取待测样品中的RNA，以提取的RNA为模板反转录得到其cDNA；
（3）PCR扩增：以步骤（2）制得的cDNA为模板，采用步骤（1）合成的引物组进行PCR扩增反应；所述PCR扩增反应的反应体系为：Premix Taq10μL，10pmol/μL的上游引物P1、下游引物P2、上游引物P3、下游引物P4各0.5μL，cDNA模板1 .0μL，无菌双蒸水补至20μL；所述PCR扩增反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性1min，54℃退火1min，72℃延伸2min，共35个循环；72℃延伸7 min；
（4）分析PCR扩增产物；
其中，所述用于检测牛诺如病毒的引物的核苷酸序列为： 上游引物P1：5ˊ-GGCAAACCACGCAAACAAC-3ˊ（SEQ ID NO .1）， 下游引物P2：5ˊ-CTTCCGAAAGGGCACAGA-3ˊ（SEQID NO .2）； 所述用于检测牛冠状病毒的引物的核苷酸序列为： 上游引物P3：5ˊ-TAGTAGTTCAGAGGTGGAT-3ˊ（SEQ ID NO .3）， 下游引物P4：5ˊ-ACAAGTCTTCAGTAGGGT-3ˊ（SEQID NO .4）；
所述双重RT-PCR方法不以疾病检测和/或治疗为目的。
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