[发明专利]超高效液质联用检测脑微透析液中11种神经递质的方法

权利要求书

1.超高效液质联用检测脑微透析液中11种神经递质的方法，其特征在于，步骤包括：脑微透析液用乙腈-水溶液或乙腈-甲酸水溶液稀释配制的脑微透析样本液，用超高效液相色谱-质谱/质谱进行定性和/或定量检测；

超效高液相色谱-质谱/质谱对脑微透析样本液进行定量检测时，采用标准曲线法，用溶有11种神经递质标准品的混合标准样本液绘制各神经递质标准品的标准曲线，得到用于定量计算的各神经递质标准品的回归方程；

所述溶有11种神经递质标准品的混合标准样本液以人工脑脊液和乙腈-水溶液或人工脑脊液和乙腈-甲酸水溶液为主要溶剂配制而成，且混合标准样本液中，人工脑脊液的体积比例恒定；

所述的11种神经递质包括胆碱类神经递质、氨基酸类神经递质和单胺类神经递质，胆碱类神经递质包括乙酰胆碱；氨基酸类神经递质包括甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸、天冬氨酸和组胺；单胺类神经递质包括去甲肾上腺素、5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸和多巴胺；

超高效液相色谱检测条件为：UPLC亲水作用色谱柱，柱温30℃～40℃，以乙腈-0.2％甲酸水为流动相的梯度洗脱程序为：

(1)体积比例为75％～80％的乙腈等度洗脱1～1.5min；

(2)乙腈体积比例从75％～80％匀速降至35％～40％梯度洗脱1.8～2.2min；

(3)体积比例为35％～40％的乙腈等度洗脱0.8～1min；

(4)乙腈体积比例从35％～40％瞬时切换至75％～80％后等度洗脱0.9～1.2min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，脑微透析样本液中，脑微透析液与乙腈-水溶液或乙腈-甲酸水溶液的体积比为1：1.5～4；乙腈-水溶液或乙腈-甲酸水溶液中，乙腈与水或者甲酸水的体积比为1～6：1，甲酸水中甲酸的体积分数为0.1％～1％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，人工脑脊液为包含氯化钙、十二水合磷酸氢二钠、六水合氯化镁、氯化钾和氯化钠的pH＝7.3～7.4水溶液，氯化钙、十二水合磷酸氢二钠、六水合氯化镁、氯化钾和氯化钠的摩尔比为1：1.6：0.8：2.25：121，氯化钙的摩尔浓度为1.2mmol·L^-1；

或者包含氯化钙、氯化钾、氯化钠的水溶液，氯化钙、氯化钾、氯化钠的摩尔比为1：1.3：49，氯化钙的摩尔浓度为2.97mmol·L^-1；

或者包含氯化钙、氯化镁、氯化钾、氯化钠的水溶液，氯化钙、氯化镁、氯化钾、氯化钠的摩尔比为1：0.71：2.25：122，氯化钙的摩尔浓度为1.2mmol·L^-1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶有11种神经递质标准品的混合标准样本液中，人工脑脊液与混合标准样本液中其余溶液的体积比为1：1.5～4；乙腈-水溶液或乙腈-甲酸水溶液中，乙腈与水或者甲酸水的体积比为1～6：1，甲酸水中甲酸的体积分数为0.1％～1％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括脑微透析样本液离心所取上清液，用于超高效液相色谱-质谱/质谱的定性和/或定量检测。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以乙腈-0.2％甲酸水为流动相的梯度洗脱程序为：0-1.2min：78％乙腈；1.2-3.2min：78％乙腈→40％乙腈；3.2-4.0min：40％乙腈；4.0-5.0min：78％乙腈。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，质谱检测条件为，离子源为电喷雾离子源，扫描模式为正离子模式；离子源喷雾电压：5.5kV；离子源气帘气：206.8～275.8kPa；碰撞气：41.4～55.1kPa；离子源温度：500℃～600℃；雾化气：379.2～448.2kPa；辅助气：379.2～448.2kPa；多反应监测模式。