[发明专利]黄鳍棘鲷微卫星标记的特异性引物及应用

权利要求书

1.一种黄鳍棘鲷微卫星标记的特异性引物，其特征是：所述特异性引物包括8对引物，分别为AL15、AL20、AL51、AL01、AL37、AL18、AL14和AL49，其中：

引物对AL15的核苷酸序列如SEQ ID NO ：1和SEQ ID NO ：2中所示；

引物对AL20的核苷酸序列如SEQ ID NO ：3和SEQ ID NO ：4中所示；

引物对AL51的核苷酸序列如SEQ ID NO ：5和SEQ ID NO ：6中所示；

引物对AL01的核苷酸序列如SEQ ID NO ：7和SEQ ID NO ：8中所示；

引物对AL37的核苷酸序列如SEQ ID NO ：9和SEQ ID NO ：10中所示；

引物对AL18的核苷酸序列如SEQ ID NO ：11和SEQ ID NO ：12中所示；

引物对AL14的核苷酸序列如SEQ ID NO ：13和SEQ ID NO ：14中所示；

引物对AL49的核苷酸序列如SEQ ID NO ：15和SEQ ID NO ：16中所示。

2.一种黄鳍棘鲷微卫星亲子鉴定方法，包括以下步骤：

（1）黄鳍棘鲷DNA提取：采集待鉴别的黄鳍棘鲷亲本样品鳍条和子代全鱼，提取基因组DNA；

（2）多态性微卫星标记筛选和引物合成：筛选并合成权利要求1中的8对引物，所述8对引物共分为三组，其中组一包括AL15、AL20和AL51，组二包括AL01、AL37和AL18，组三包括AL14和AL49，组一和组二在正向引物的5’端分别用FAM、HEX和TAMRA三种不同的荧光基团进行修饰，组三在正向引物的5’端分别用FAM和HEX两种不同的荧光基团进行修饰，用于PCR分析；

（3）微卫星位点基因分型：采用荧光PCR反应分别利用步骤（2）中的三组引物对步骤（1）中的基因组DNA进行PCR扩增，然后将扩增产物混合；

（4）对混合后的扩增产物进行基因分型，利用基因分型结果对亲本基因型和子代基因型进行分析，判定子代个体的父母本。

3.根据权利要求2所述黄鳍棘鲷微卫星亲子鉴定方法，其特征是：步骤（3）中荧光PCR反应时，每组反应体系总体积为10 μL，包括：双蒸水7.6 μL，含Mg²⁺的10 × PCR缓冲液1 μL，浓度为10 mmol /L的 dNTPs 0.15 μL，rTaqDNA 聚合酶0.15 μL，正反向引物各0.3 μL，浓度为100 ng/μL的基因组DNA 0.5 μL。

4.根据权利要求2所述黄鳍棘鲷微卫星亲子鉴定方法，其特征是：步骤（3）中荧光PCR反应时，PCR 反应条件为：95 ℃ 预变性4 min；95 ℃ 变性30 s，退火温度60 ℃ 30 s，72 ℃延伸40 min，30个循环；72 ℃延伸10 min；4 ℃保存。

5.权利要求1所述黄鳍棘鲷微卫星标记的特异性引物在黄鳍棘鲷亲子鉴定中的应用。