[发明专利]一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒及其PCR方法

权利要求书

1.一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒，其特征在于：包括两组用于ApoE基因分型检测的混合液和三组含有重组DNA的质控品，两组所述用于ApoE基因分型检测的混合液包括用于ApoE基因分型检测的特异性引物对、特异性探针对、Taq HS DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸混合液、反应缓冲液和反应增强剂。

2.根据权利要求1所述的一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒，其特征在于：所述用于ApoE基因分型检测特异性引物对包括分别检测rs429358位点和rs7412位点的第一组引物和第二组引物，其中，

第一组引物：

检测rs429358位点的引物对的上游引物的核苷酸序列为SEQ 1；

检测rs429358位点的引物对的下游引物的核苷酸序列为SEQ 2。

第二组引物：

检测rs7412位点的引物对的上游引物的核苷酸序列为SEQ 3；

检测rs7412位点的引物对的下游引物的核苷酸序列为SEQ 4。

3.根据权利要求2所述的一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒，其特征在于：所述用于ApoE基因分型检测特异性探针对设置为与所述第一组引物和第二组引物配合使用的第一组探针和第二组探针，且该第一探针和第二探针均为3’端带有荧光基团BHQ-MGB的探针，其中，

第一组探针:

检测rs429358位点的第一条探针的核苷酸序列为SEQ 5，5’端和3’端的荧光基团分别为VIC^TM和BHQ-MGB；

检测rs429358位点的第二条探针的核苷酸序列为SEQ 6，5’端和3’端的荧光基团分别为FAM^TM和BHQ-MGB。

第二组探针：

检测rs7412位点的第一条探针的核苷酸序列为SEQ 7，5’端和3’端的荧光基团分别为VIC^TM和BHQ-MGB；

检测rs7412位点的第二条探针的核苷酸序列为SEQ 8，5’端和3’端的荧光基团分别为FAM^TM和BHQ-MGB。

4.根据权利要求1所述的一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒，其特征在于：所述Taq HS DNA聚合酶由下列物质混合而成：

20mmol/L的pH值为8.0三(羟甲基)氨基甲烷、100mmol/L的氯化钾、0.1mmol/L的乙二胺四乙酸、1mmol/L二硫苏糖醇、0.5％的Tween 20、0.5％的乙基苯基聚乙二醇、50％的甘油。

5.根据权利要求1所述的一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒，其特征在于：所述反应缓冲液由下列物质混合而成：100mmol/L的pH8.3三(羟甲基)氨基甲烷、500mmol/L的氯化钾、15mmol/L氯化镁。

6.根据权利要求1所述的一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒，其特征在于：所述反应增强液由下列物质混合而成：10mmol/L的亚精胺、10mmol/L的岩藻糖、1mmol/L的N-乙酰基-D-葡萄胺、0.5％的肌醇。

7.根据权利要求1所述的一种适合血液基因组DNA样本的ApoE基因分型检测的试剂盒，其特征在于：三组所述含有重组DNA的质控品包括第一阳性质控品、第二阳性质控品、第三阳性质控品，所述第一阳性质控品、第二阳性质控品、第三阳性质控品的浓度均为10⁴copies/μL，其中所述第一阳性质控品选用ApoE基因E2/E2分型的重组质粒，所述第二阳性质控品选用ApoE基因E4/E4分型的重组质粒，所述第三阳性质控品选用ApoE基因E2/E4分型的重组质粒。