[发明专利]体外检测MUSK-Ab和LRP4-Ab的方法及试剂盒

权利要求书

1.体外检测MUSK-Ab和LRP4-Ab的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)细胞转染重组质粒：取293T细胞，将293T细胞转染pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒和/或pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒，得到转染pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞和/或转染pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞；

2)转染细胞的固定与保存：向步骤2)中的转染pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞和/或转染pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞添加多聚甲醛后固定15～30min；磷酸盐缓冲液洗涤之后添加牛血清白蛋白和TritonX-100进行封闭、通透2～3h，得到封闭、通透的pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞和/或封闭、通透的pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞；

3)免疫荧光测定：将步骤2)中所述封闭、通透后的pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞和/或封闭、通透的pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞在3～5℃条件下保存3～4周后进行免疫荧光测定；取待测血清，添加至封闭、通透后的pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞和/或封闭、通透的pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞中，室温下孵育45min～2h，磷酸盐缓冲液洗涤之后加入Alexa Fluor^TM568标记的羊抗人IgG，室温下孵育45min～2h，磷酸盐缓冲液洗涤后使用荧光显微镜的蓝色激发光和绿色激发光激发，观察并拍照记录；拍照时拍摄转染重组质粒的293T细胞荧光照片以及待测血清与转染重组质粒的293T细胞共孵育荧光照片，将转染重组质粒的293T细胞荧光照片以及待测血清与转染重组质粒的293T细胞共孵育荧光照片Merge后，根据Merge后呈现的颜色判断待测血清是阳性或阴性。

2.根据权利要求1所述的体外检测MUSK-Ab和LRP4-Ab的方法，其特征在于，所述细胞转染重组质粒过程中使用转染试剂进行转染，转染后置于37℃，5％CO₂的培养箱中培养24～60h，之后检测转染效果，挑选转染成功的细胞。

3.根据权利要求1所述的体外检测MUSK-Ab和LRP4-Ab的方法，其特征在于，对转染pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞和/或转染pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞进行固定的温度是3～5℃，封闭和通透的温度为35～38℃。

4.体外检测MUSK-Ab的试剂盒，其特征在于，包括封闭、通透后的pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞，所述封闭、通透后的pCMV6-AC-GFP-MuSK重组质粒的转染细胞由权利要求1的步骤2)中所述的转染细胞的固定与保存制备所得。

5.体外检测LRP4-Ab的试剂盒，其特征在于，包括封闭、通透后的pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞，所述封闭、通透后的pCMV6-AC-GFP-LRP4重组质粒的转染细胞由权利要求1的步骤2)中所述的转染细胞的固定与保存制备所得。