[发明专利]一种检测呕吐毒素的免疫层析试纸

权利要求书

1.一种检测呕吐毒素的免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫（1）、结合垫（2）、层析膜（3）及吸收垫（4），其特征在于，所述的结合垫上吸附有纳米材料标记的抗呕吐毒素单克隆抗体；所述的层析膜上设有用呕吐毒素人工抗原溶液印制的隐形检测印迹（5）和用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹（6）；所述的纳米材料为氮掺杂碳纳米材料；

所述的氮掺杂碳纳米材料标记的抗呕吐毒素单克隆抗体的制备方法为：

（1）表面羧基化SiO₂纳米颗粒的制备

采用反相微乳法合成SiO₂纳米颗粒：按体积比10:30:10:1比例取Ttiton X-100、环己烷、正己醇、超纯水搅拌形成5.1 mL微乳液，加入200 μL氨水搅匀后，再加入80 μL正硅酸乙酯，室温避光反应24 h；反应结束后6000 rpm离心10 min，乙醇洗涤4次后用1 mL乙醇复溶，形成溶液A；将0.47 g氯乙酸加入到2.5 mL浓度为6 mol/ L的NaOH溶液中，形成溶液B；将溶液A加入到溶液B中，室温搅拌反应70 min；反应结束后，6000 rpm离心10 min，将得到的沉淀用双蒸水洗涤4次后，氮吹干燥，4℃密封保存；

（2）氮掺杂碳纳米材料SiO₂荧光探针的制备

将2 mg表面羧基化的SiO₂纳米颗粒和2 mg N,N'-羰基二咪唑加入到400 μL N,N-二甲基甲酰胺中，室温下磁力搅拌反应3 h；将其加入到1 mL浓度为l mg/mL氮掺杂碳纳米材料溶液中，其中氮掺杂碳纳米材料溶解在0.1mol/L NaOH溶液中，15 min加完，室温避光搅拌反应4 h后；再次加入20 μL正硅酸乙酯，0.12 g氯乙酸，0.25 mg 氮掺杂碳纳米材料颗粒，室温避光搅拌反应2 h进行包壳，反复包壳3次，氮吹干燥，4℃密封保存；

（3）呕吐毒素单克隆抗体的标记

取步骤（2）制备的荧光探针15 mg溶于1.5 mL二氧六环、1.5 mL N,N-二甲基甲酰胺、60μL三乙胺的混合溶液中，冰浴30 min，搅拌加入20 μL氯甲酸异丁酯，冰浴2 h，得到标记溶液；将标记溶液滴加到500 μL浓度为l mg/mL的单克隆抗体溶液中，室温搅拌反应过夜；4℃条件下，反应物用0.01 mol/L、pH 7.4的PBS缓冲溶液透析3 d，得到氮掺杂碳纳米材料标记的呕吐毒素单克隆抗体溶液，4℃保存。

2.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素的免疫层析试纸，其特征在于，所述的支撑体包括设置在吸附层底面的底层（7）和设置在吸附层顶面的面层（8）。

3.根据权利要求1所述的检测呕吐毒素的免疫层析试纸，其特征在于，所述的氮掺杂碳纳米材料是以壳聚糖为碳源，乙二胺为氮掺杂剂，采用水热法制备而成，具体方法为：将壳聚糖2.5 g溶于5 mL超纯水中，加入5 mL乙二胺，混匀后置于高压反应釜的聚四氟乙烯内胆中，180℃反应2 h，反应结束后将产物抽滤，双蒸水洗涤2次，60℃烘箱干燥得到氮掺杂碳纳米材料。