[发明专利]一种检测呕吐毒素的免疫层析试纸

说明书

本发明公开了一种检测呕吐毒素的免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫、结合垫、层析膜及吸收垫，所述的结合垫上吸附有纳米材料标记的抗DON单克隆抗体；所述的层析膜上设有用DON人工抗原溶液印制的隐形检测印迹和用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹；所述的纳米材料为氮掺杂碳纳米材料、碳纳米材料、碳量子点荧光纳米颗粒。本发明的试纸条具有特异性强、灵敏度高、稳定性高、安全性好、简便、快速、结果显示形象、直观、适用范围广、携带方便及可定量的特点。在保障食品安全、保护消费者健康方面具有极其重要的意义，将具有明显的经济效益和社会效益。

技术领域

本发明涉及一种免疫层析试纸，特别是涉及一种检测呕吐毒素(DON)的免疫层析试纸。

背景技术

呕吐毒素(Vomitoxin，DON)主要是由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、粉红镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等产生的毒素，该毒素广泛存在于霉变的小麦、燕麦、玉米、大麦等粮食(饲料)及其制品中。目前，全球范围内的粮食和饲料均受其污染，这严重危害了人类和动物的健康。DON主要作用于增殖活跃的动物细胞组织，如淋巴细胞、粘膜上皮、骨髓和肝等，其中对淋巴细胞的损害最为严重。该毒素能抑制细胞蛋白质合成、干扰能量和脂肪代谢，对生物膜的功能和多种酶活性有明显抑制作用，同时可引起动物体的脂质过氧化损伤。在联合国粮农组织和世界卫生组织年联合召开的第三次添加剂和污染物会议上，DON被定为最危险的自然发生污染物之一，严重危害人畜的安全。

目前国内外针对DON的检测方法主要有生物鉴定法、化学分析法、仪器分析法和免疫分析法4大类。生物鉴定法的优点是待检样品不需很纯，缺点是灵敏度低、实验周期较长。化学分析法的优点是经济实用，但不能准确定量，且分析结果的可重复性和再现性差。仪器分析法具有高分离、高检测效能及快速分析能力等优势，但对样品的前处理和操作人员的技术要求高，且仪器设备价格昂贵，不适于现场快速检测。免疫分析法操作简单，成本低，结合氮掺杂碳纳米材料标记物具有激发发射波长灵活可调、荧光稳定性高且无闪烁现象等优势，最终可实现高敏感、高稳定的现场快速定量检测，社会及经济意义重大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测呕吐毒素(DON)的免疫层析试纸，该试纸具有特异、灵敏、快速、简便等特点。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种检测呕吐毒素的免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫、结合垫、层析膜及吸收垫，所述的结合垫上吸附有纳米材料标记的抗DON单克隆抗体；所述的层析膜上设有用DON人工抗原溶液印制的隐形检测印迹和用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹；所述的纳米材料为氮掺杂碳纳米材料、碳纳米材料、碳量子点荧光纳米颗粒。

支撑体包括设置在吸附层底面的底层和设置在吸附层顶面的面层。

氮掺杂碳纳米材料N-CDs是以壳聚糖为碳源，乙二胺为氮掺杂剂，采用水热法制备而成，具体方法为：将壳聚糖2.5g溶于5mL超纯水中，加入5mL乙二胺，混匀后置于高压反应釜的聚四氟乙烯内胆中，180℃反应2h，反应结束后将产物抽滤，双蒸水洗涤2次，60℃烘箱干燥得到N-CDs。

氮掺杂碳纳米材料标记的抗DON单克隆抗体的制备方法为：

(1)表面羧基化SiO₂纳米颗粒的制备