[发明专利]一种用于诊断前列腺癌的层析试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于诊断前列腺癌血清学标志物的层析试纸条，包括一个底板，其特征在于：所述的底板上依次设置有样品垫、结合垫、隔血层、层析垫和吸水垫，所述的样品垫的一侧和所述的结合垫的一侧上下叠合设置，所述的结合垫的另外一侧和所述的层析垫的一侧上下叠合设置，所述的层析垫的另外一侧和所述的吸水垫的一侧上下叠合设置，所述的结合垫上设置有偶联了total PSA抗原抗体的磁性纳米免疫探针；所述的层析垫上按照液体流动方向依次设置有第一检测线、第二检测线和质控线，所述的第一检测线上设置有抗freePSA的单克隆抗体，第二检测线上设置有抗结合α-1抗糜蛋白酶ACT的前列腺特异抗原的抗体，所述的质控线上设置有能结合total PSA抗体的IgG抗体。

2.根据权利要求1所述的一种用于诊断前列腺癌的层析试纸条，其特征在于：还包括一个隔血层，所述的隔血层设置在结合垫和层析垫之间。

3.根据权利要求1所述的一种用于诊断前列腺癌血清学标志物的层析试纸条，其特征在于：沿底板的长度方向，所述的样品垫、结合垫、隔血层、硝酸纤维素膜和吸水垫的各重叠部分的长度为0.5-2.0 mm。

4.根据权利要求1所述的一种用于诊断前列腺癌的层析试纸条，其特征在于：所述的样品垫和结合垫均采用玻璃纤维素膜；所述的层析垫采用硝酸纤维素膜。

5.根据权利要求1所述的一种用于诊断前列腺癌的层析试纸条，其特征在于：所述的底板采用聚氯乙烯材料。

6.根据权利要求1所述的一种用于诊断前列腺癌的层析试纸条，其特征在于：所述的硝酸纤维素膜采用硝酸纤维素膜milipore 95或者satorisi135膜；所述的第一检测线、第二检测线和质控线两两相邻的线之间的间隔距离大于2 mm；所述的磁珠的粒径为100-150nm。

7.权利要求1所述的一种用于诊断前列腺癌的层析试纸条的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1) 一个制备偶联了total PSA抗原抗体的磁性纳米免疫探针的步骤：在2吗琳代乙磺酸缓冲液中，用N-C二甲/胺-3-丙基-N-乙基碳二亚胺、N-一羟基琥珀酰亚胺活化羧基纳米磁珠表面的羧基，分离磁珠，弃上清，洗涤未反应的N-C二甲/胺-3-丙基-N-乙基碳二亚胺、N-一羟基琥珀酰亚胺，然后加入抗total PSA的单克隆抗体，制得偶联了total PSA抗原抗体的磁性纳米免疫探针；

2) 一个制备结合垫和样品垫的步骤：将玻璃纤维素膜浸泡在含有海藻糖、蔗糖、聚乙二醇辛基苯基醚-100的硼酸盐缓冲液中，干燥获得结合垫，将步骤1）得到的偶联了totalPSA抗原抗体的磁性纳米免疫探针固定到空白结合垫上，然后将玻璃纤维素膜浸泡在含盐、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮的硼酸盐吐温缓冲液中，待润湿后进行干燥获得样品垫；

3) 一个制备第一检测线、第二检测线和质控线的步骤：将抗free PSA的单克隆抗体、抗结合α-1抗糜蛋白酶ACT的前列腺特异抗原的抗体和能结合total PSA抗体的IgG抗体依次包被到硝酸纤维素膜上，带有第一检测线、第二检测线和质控线的硝酸纤维素膜即为层析垫；

4) 一个组装试纸条的步骤：在底板上依次设置样品垫、结合垫、层析垫和吸水垫，各相邻垫之间要相互重叠0.5-2.0 mm，得到联合检测free PSA和PSA-ACT的免疫层析检测试纸条，所述的质控线相比于第二检测线更靠近吸水垫。

8.权利要求1所述的一种用于诊断前列腺癌血清学标志物的层析试纸条的应用方法，其特征在于包括以下步骤：

1) 步骤一，将待测样本加到联合检测双指标的免疫层析检测试纸条的样品垫上，通过层析作用待测样本会从样品垫出发，依次经过结合垫、层析垫和吸水垫；

2) 步骤二，待待测样本进入吸水垫后，用专用的磁敏定量分析仪分别检测层析垫上的第一检测线和第二检测线的磁信号，和层析垫上的质控线的磁信号强度，实现对free PSA和PSA-ACT的定量检测。