[发明专利]一种基于双标记信号放大的间接背景荧光胶体金免疫层析试纸条及其应用

权利要求书

1.一种试剂盒，其包括试纸条和双标记胶体金探针；

所述双标记胶体金探针由金纳米颗粒标记的生物素化的抗目标物的抗体和金纳米颗粒标记的链霉亲和素组成；

所述试纸条由依次连接并固定于基底层上的样品垫、设有检测线和质控线的包被膜，以及吸水垫组成；所述包被膜与所述基底层之间设有荧光背板；

所述检测线和所述质控线相互分离；

所述检测线处包被有目标物抗原；所述抗目标物的抗体能够特异性结合所述目标物抗原；

所述质控线处包被有抗所述抗目标物的抗体的抗体；

所述检测线位于所述包被膜靠近所述样品垫的一端；

所述质控线位于所述包被膜靠近所述吸水垫的一端。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

所述金纳米颗粒标记的生物素化的抗目标物的抗体中，所述金纳米颗粒与生物素化的抗目标物的抗体的质量比为(300～1000)：1；

或，所述金纳米颗粒标记的链霉亲和素中，所述金纳米颗粒与链霉亲和素的质量比为(50～500)：1；

或，所述抗目标物的抗体为抗目标物的单克隆抗体或多克隆抗体。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：

所述抗目标物的抗体为抗目标物的单克隆抗体；

或，所述抗所述抗目标物的抗体的抗体为羊抗鼠IgG；

或，所述金纳米颗粒的粒径为30nm；

或，所述基底层的材料为聚氯乙烯；

或，所述荧光背板为表面喷涂有荧光的PVC塑料板；

或，所述样品垫为玻璃纤维素膜；

或，所述包被膜为硝酸纤维素膜；

或，所述检测线与所述质控线之间的距离为3mm。

4.权利要求1-3任一所述的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：分别制备权利要求1-3任一所述的试剂盒中的试纸条和双标记胶体金探针；

制备所述试纸条的方法包括如下步骤：

I、分别制备所述样品垫、所述设有检测线和质控线的包被膜，以及所述吸水垫；

II、在所述基底层的中部覆盖所述荧光背板，然后将步骤I得到的设有检测线和质控线的包被膜覆盖在所述荧光背板上，再将步骤I得到的所述样品垫和步骤I得到的所述吸水垫分别搭接于所述包被膜的两端，得到所述试纸条；

所述设有检测线和质控线的包被膜按照如下方法制备：将权利要求1-3中所述的目标物抗原和权利要求1-3中所述的羊抗鼠IgG分别喷涂在所述包被膜的检测线区域和质控线区域，形成所述检测线和所述质控线，得到所述设有检测线和质控线的包被膜；

制备所述双标记胶体金探针的方法为权利要求1-3中所述的金纳米颗粒标记的生物素化的抗目标物的抗体和金纳米颗粒标记的链霉亲和素的制备方法。

5.权利要求1-3任一所述的试剂盒或权利要求4所述的制备方法在检测目标物中的应用；

或，权利要求1-3任一所述的试剂盒或权利要求4所述的制备方法在检测待测样本中是否含有目标物中的应用；

或，权利要求1-3任一所述的试剂盒或权利要求4所述的制备方法在检测待测样本中目标物含量中的应用。

6.一种检测待测样本中是否含有目标物的方法，包括如下步骤：

(c1)将待测样本用免疫磁性微球进行富集，得到富集后的样本；

(c2)向富集后的样本中加入权利要求1-3中任一所述的双标记胶体金探针，得到混合溶液；

(c3)将所述混合溶液孵育3min，然后加入权利要求1-3中任一所述的试纸条的样品垫上，层析10min后，观察检测线和质控线的显色情况；

若C线和T线均显红色，则所述待测样本中不含有目标物或候选不含有目标物；

若C线显红色，T线不显色，则所述待测样本中含有目标物或候选含有目标物。