[发明专利]一种基于双标记信号放大的间接背景荧光胶体金免疫层析试纸条及其应用

说明书

本发明公开了一种基于双标记信号放大的间接背景荧光胶体金免疫层析试纸条及其应用。所述试纸条包括铺有荧光的PVC塑料背板、PVC底板、硝酸纤维素膜、样品垫和吸水纸五部分。本发明还公开了双标记胶体金探针，所述双标记胶体金探针是由金纳米颗粒标记的生物素化的抗目标物的抗体和金纳米颗粒标记的链霉亲和素组成，利用生物素‑链霉亲和素分子之间超强的亲和力实现信号放大。本发明的荧光胶体金免疫层析试纸条在检测前利用免疫磁性微球对样本进行前处理，在外加磁场中可高效快速分离富集目标物。本发明试纸条稳定性好，灵敏度高，不受基质干扰，能够实现对样本的快速定性或定量检测，且操作步骤简便、可控性强，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于食品安全检测和生物医学技术领域，具体涉及一种基于双标记信号放大的间接背景荧光胶体金免疫层析试纸条及其应用。

背景技术

随着我国加入世贸组织，人们对食品由需求型逐步向质量型转变。有害物质残留问题已成为世界各国食品安全检测的重要指标，我国政府虽然也制定了一系列法律法规和技术标准限制有害物质残留的标准，但加强残留检测，建立残留检测体系，向社会提供安全卫生的食品，保护人类健康势在必行。

目前对有害物质残留的检测主要是利用仪器和快速检测试纸条等方法。仪器方法主要有气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱及液相色谱-质谱联用法，由于仪器方法价格高昂，检测人员技术要求过高，检测过程繁琐，操作不易推广等限制，使得简便、低廉、快速的免疫层析技术发展迅猛，在食品安全、医学诊断、环境监测等领域得到了广泛的应用。其中，基于胶体金为标记物的免疫层析技术是运用最成功最广泛的一种快速筛查手段，但因不同地区、品种、时间的样本中基质干扰较为严重，使得检测试纸条的准确度，重复性不容乐观；而且试纸条检测结果的稳定性，灵敏度仍然有待改进。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种试剂盒。

本发明提供的试剂盒包括试纸条和双标记胶体金探针；

所述双标记胶体金探针由金纳米颗粒标记的生物素化的抗目标物的抗体和金纳米颗粒标记的链霉亲和素组成；

所述试纸条由依次连接并固定于基底层上的样品垫、设有检测线和质控线的包被膜，以及吸水垫组成；所述包被膜与所述基底层之间设有荧光背板；

所述检测线和所述质控线相互分离；

所述检测线处包被有目标物抗原；所述抗目标物的抗体能够特异性结合所述目标物抗原；

所述质控线处包被有抗所述抗目标物的抗体的抗体；

所述检测线位于所述包被膜靠近所述样品垫的一端；

所述质控线位于所述包被膜靠近所述吸水垫的一端。

上述试剂盒中，所述金纳米颗粒标记的生物素化的抗目标物的抗体中，所述金纳米颗粒与生物素化的抗目标物的抗体的质量比可为(300～1000)：1；具体可为500：1。

所述金纳米颗粒标记的链霉亲和素中，所述金纳米颗粒与链霉亲和素的质量比可为(50～500)：1；具体可为100：1。

所述抗目标物的抗体为抗目标物的单克隆抗体或多克隆抗体。

所述检测线处包被有目标物抗原与BSA载体蛋白的偶联物。

所述金纳米颗粒标记的生物素化的抗目标物的抗体的制备方法如下：

m1)生物素化抗目标物的抗体溶液的制备：将氨基化生物素加入到抗目标物的抗体溶液中，反应1h后用透析膜透析，然后从透析袋中吸出生物素化抗体，并用PBS溶液调整生物素化抗体的浓度，得到所述生物素化抗目标物的抗体溶液。