[发明专利]一种重组大肠杆菌及合成四氢嘧啶的应用

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌，其特征在于所述重组大肠杆菌是将大肠杆菌E.coli MG1655的二氨基庚二酸脱羧酶lysA基因敲出，并导入核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示四氢嘧啶合成基因簇ectABC获得的。

2.如权利要求1所述重组大肠杆菌，其特征在于所述四氢嘧啶合成基因簇ectABC先与pTrc99a质粒连接，再将重组质粒导入宿主菌获得的。

3.一种权利要求1重组大肠杆菌在转化合成四氢嘧啶中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为：以重组大肠杆菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂加入转化液中，在25-45℃、150-200rpm条件下进行转化反应6-48h，反应结束，获得四氢嘧啶；所述转化液终浓度组成：L-天冬氨酸钠5-80g/L，甘油5-80g/L，氯化钾0-50g/L，溶剂为PBS缓冲溶液，pH6.0-8.0。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述湿菌体用量以转化液体积计为4-7g/L。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于湿菌体发酵方法为：将重组大肠杆菌接种至发酵培养基，在28-37℃、150-200rpm条件下震荡培养至OD600为0.6-0.8，再加入终浓度50mg/mL的IPTG进行诱导，在28-37℃、150-200rpm条件下震荡培养8-12h，获得发酵液，将发酵液离心，获得湿菌体；所述发酵培养基终浓度组成：酵母提取物5-20g/L，胰蛋白胨5-15g/L，氯化钠10-50g/L，溶剂为去离子水，pH7.0-7.3。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述湿菌体在发酵前先进行种子培养，再将种子液以体积浓度5-10％的接种量接种至发酵培养基，所述种子培养方法为：将重组大肠杆菌接种于种子培养基，在28-37℃、150-200rpm条件下震荡培养至对数生长期，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成：酵母提取物5-20g/L，胰蛋白胨5-15g/L，氯化钠10-50g/L，溶剂为去离子水，pH7.0-7.3。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述转化液终浓度组成：L-天冬氨酸钠10g/L，甘油10g/L，氯化钾10g/L，溶剂为PBS缓冲溶液，pH6.5。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述发酵培养基终浓度组成：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，溶剂为去离子水，pH7.0。

10.一种权利要求1所述重组大肠杆菌(Escherichia coli)Hect，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO.60398，保藏日期2018年6月28日，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编：510075。