[发明专利]一种乳腺癌21基因检测试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201810999037.8 | 申请日： | 2018-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN108624697B | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 唐荣;苏丽 | 申请（专利权）人： | 默禾医疗科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 宋平 |
| 地址： | 200120 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 基因检测试剂盒 检测 乳腺癌 引物 基因 探针混合液 特异性探针 检测结果 两对引物 临床检测 多样品 反应管 缓冲液 扩增 探针 清晰 科研 | ||
1.一种乳腺癌21基因检测试剂盒，其特征是21个基因为：ACTB、GAPDH、RPLPO、GUS、TFRC、CD68、BAG1、GSTM1、HER2、GRB7、MMP11、CTSL2、KI67、STK15、CCNB1、MYBL2、Survivin、ESR1、PGR、BCL2和SCUBE2；
试剂盒中针对21个基因各设计了两对引物和2条特异性探针，21个基因所对应的引物序列和TaqMan探针序列分别如下：
（1）检测ACTB基因的引物序列为：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4，检测ACTB基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；具体序列如下：
ACTB：
F1:5'-CCAACTTGAGATGTATGAAG -3' （SEQ ID NO.1）
R1:5'-GTCAGTGTACAGGTAAGC -3' （SEQ ID NO.2）
F2:5'-TGGAGAAGAGCTACGA -3' （SEQ ID NO.3）
R2:5'-GAAGGAAGGCTGGAAG -3' （SEQ ID NO.4）
P1:5'FAM-CTGCCTCCACCCACTCCC-3'MGB （SEQ ID NO.5）
P2:5'VIC-CGGAACCGCTCATTGCCA-3'MGB （SEQ ID NO.6）；
（2）检测GAPDH基因的引物序列为：SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9和SEQID NO.10，检测GAPDH基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12；具体序列如下：
GAPDH：
F1:5'-GCCTCCAAGGAGTAAGA -3' （SEQ ID NO.7）
R1:5'-GCAGTGAGGGTCTCTC -3' （SEQ ID NO.8）
F2:5'-CCATGACAACTTTGGTATCA -3' （SEQ ID NO.9）
R2:5'-GCCATCCACAGTCTTCA -3' （SEQ ID NO.10）
P1:5'FAM-TCCTCTTGTGCTCTTGCTGG-3'MGB （SEQ ID NO.11）
P2:5'VIC-AGTCCATGCCATCACTGCCA-3'MGB （SEQ ID NO.12）；
（3）检测RPLPO基因的引物序列为：SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16，检测RPLPO基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18；具体序列如下：
RPLPO：
F1:5'--GGTTGAAGCCAAGGAAGA -3' （SEQ ID NO.13）
R1:5'-TGGTGATTAGTCAAAGAGACC -3' （SEQ ID NO.14）
F2:5'-GGGCACCATTGAAATCCA -3' （SEQ ID NO.15）
R2:5'-GGAGATGTTGAGCATGTTCA -3' （SEQ ID NO.16）
P1:5'FAM-ATCCTCGTCCGACTCCTCCG-3'MGB （SEQ ID NO.17）
P2:5'VIC-CGTGGCTTCGCTGGCTCC-3'MGB （SEQ ID NO.18）；
（4）检测GUS基因的引物序列为：SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21和SEQID NO.22，检测GUS基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24；具体序列如下：
GUS：
F1:5'-CCACAGCAGCAGAACA-3' （SEQ ID NO.19）
R1:5'- CTGCTAGAATAGATGACCACAA-3' （SEQ ID NO.20）
F2:5'-GGTGTCAACAAGCATGAGA -3' （SEQ ID NO.21）
R2:5'-CAGCGAAGCAGGTTGAA -3' （SEQ ID NO.22）
P1:5'FAM-CCTCCTGGACTGTTCACGGC-3'MGB （SEQ ID NO.23）
P2:5'VIC-TCCTTCACCAGCAGCGGC-3'MGB （SEQ ID NO.24）；
（5）检测TFRC基因的引物序列为：SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.27和SEQID NO.28，检测TFRC基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30；具体序列如下：
TFRC：
F1:5'-GGACTGACATTTAGCGTAG -3' （SEQ ID NO.25）
R1:5'-GCCACATGCTTTCATTTAAG -3' （SEQ ID NO.26）
F2:5'-GAGAGGATTCCTGAGTTGAA -3' （SEQ ID NO.27）
R2:5'-TCCAGGTTCAATTCAACATCA -3' （SEQ ID NO.28）
P1:5'FAM-TGCGTAACACCCGAACCAGG-3'MGB （SEQ ID NO.29）
P2:5'VIC-CACGAACTGACCAGCGACCT-3'MGB （SEQ ID NO.30）；
（6）检测CD68基因的引物序列为SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32和SEQ ID NO.33和SEQID NO.34，检测CD68基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36；具体序列如下：
CD68：
F1:5'-GGCAGAACTGCTTGAA -3' （SEQ ID NO.31）
R1:5'-GCGATCTTGGCTTAGTG -3' （SEQ ID NO.32）
F2:5'-ACCTGCTTCTCTCATTCCA -3' （SEQ ID NO.33）
R2:5'-CTCCACCGCCATGTAGA -3' （SEQ ID NO.34）
P1:5'FAM-CGGCTCACTGCAACCTCCA-3'MGB （SEQ ID NO.35）
P2:5'VIC-CCTTCTGCTGGAGGTCCTGC-3'MGB （SEQ ID NO.36）；
（7）检测BAG1基因的引物序列为：SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38和SEQ ID NO.39和SEQID NO.40，检测BAG1基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.41和SEQ ID NO.42；具体序列如下：
BAG1：
F1:5'-GCTACTACCTCTGCTTGA -3' （SEQ ID NO.37）
R1:5'-GTGAGTTGAATTCTGAAGGA -3' （SEQ ID NO.38）
F2:5'-CCACAGGCCATGAGATAA -3' （SEQ ID NO.39）
R2:5'-GGTTCTAACCTTCTGAAGACA -3' （SEQ ID NO.40）
P1:5'FAM-TCCTCACCTTCCTTCCTCCA-3'MGB （SEQ ID NO.41）
P2:5'VIC-CCGTTCCTTGGATGGAGCCT-3'MGB （SEQ ID NO.42）；
（8）检测GSTM1基因的引物序列为：SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44和SEQ ID NO.45和SEQ ID NO.46，检测GSTM1基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48；具体序列如下：
GSTM1：
F1:5'-CCCATCATTACCCTTCC -3' （SEQ ID NO.43）
R1:5'-GCCCTTTAAAGCAGACA -3' （SEQ ID NO.44）
F2:5'-GAGGGCTTGGAGAAGAA -3' （SEQ ID NO.45）
R2:5'-GACAGCCATCTTTGAGAAA -3' （SEQ ID NO.46）
P1:5'FAM-AGCCAGCCTGACCTTCCTTC-3'MGB （SEQ ID NO.47）
P2:5'VIC-AGTCCAGCCGCTTCCTCC-3'MGB （SEQ ID NO.48）；
（9）检测HER2基因的引物序列为：SEQ ID NO.49和SEQ ID NO.50和SEQ ID NO.51和SEQID NO.52，检测HER2基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.53和SEQ ID NO.54；具体序列如下：
HER2：
F1:5'-CTCCGACCACTTCCAG -3' （SEQ ID NO.49）
R1:5'-CCCTTCCAGCCATCTG -3' （SEQ ID NO.50）
F2:5'-GGTGGTTGGCATTCTGA -3' （SEQ ID NO.51）
R2:5'-CCGCATCGTGTACTTC -3' （SEQ ID NO.52）
P1:5'FAM-CTGCCATGCCAGGAACCTGT-3'MGB （SEQ ID NO.53）
P2:5'VIC-TTCTGCTGCCGTCGCTTGA-3'MGB （SEQ ID NO.54）；
（10）检测GRB7基因的引物序列为：SEQ ID NO.55和SEQ ID NO.56和SEQ ID NO.57和SEQ ID NO.58，检测GRB7基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.59和SEQ ID NO.60；具体序列如下：
GRB7：
F1:5'-CCTCCCTCAGATAGAA -3' （SEQ ID NO.55）
R1:5'-GCTAGGAGAAGGAGAG -3' （SEQ ID NO.56）
F2:5'-GGCTTCGGATCTTCTGA -3' （SEQ ID NO.57）
R2:5'-CCGTACTTGAAGAGGC -3' （SEQ ID NO.58）
P1:5'FAM-CCACTCCAGTCCACTCCTGA-3'MGB （SEQ ID NO.59）
P2:5'VIC-AGATGAGCAGAGCCGCACC-3'MGB （SEQ ID NO.60）；
（11）检测MMP11基因的引物序列为：SEQ ID NO.61和SEQ ID NO.62和SEQ ID NO.63和SEQ ID NO.64，检测MMP11基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.65和SEQ ID NO.66；具体序列如下：
MMP11：
F1:5'-AGGTCAGGTCTTGGTA -3' （SEQ ID NO.61）
R1:5'-CTGGATTCTGGAGAACA -3' （SEQ ID NO.62）
F2:5'--CCAGATGCCTGTGAGGA -3' （SEQ ID NO.63）
R2:5'-AGCCCGCTTTGAAGAA -3' （SEQ ID NO.64）
P1:5'FAM-TTCTGGCTGACAATCCTGGA-3'MGB （SEQ ID NO.65）
P2:5'VIC-TCCACCATCCGAGGCGAGC-3'MGB （SEQ ID NO.66）；
（12）检测CTSL2基因的引物序列为：SEQ ID NO.67和SEQ ID NO.68和SEQ ID NO.69和SEQ ID NO.70；检测CTSL2基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.71和SEQ ID NO.72；具体序列如下：
CTSL2：
F1:5'-CCTAGATGGTATAGCCTATTAC -3' （SEQ ID NO.67）
R1:5'-AGCACAGTGATGTGTTG -3' （SEQ ID NO.68）
F2:5'-GGCTGGTCTTGAACTCA -3' （SEQ ID NO.69）
R2:5'-TGGCTCACATCTGTAATC -3' （SEQ ID NO.70）
P1:5'FAM-TGGTACAGCCTGTTGCTCCT-3'MGB （SEQ ID NO.71）
P2:5'VIC-CCACCTGCCTCAGCCTCC-3'MGB （SEQ ID NO.72）；
（13）检测KI67基因的引物序列为：SEQ ID NO.73和SEQ ID NO.74和SEQ ID NO.75和SEQ ID NO.76，检测KI67基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.77和SEQ ID NO.78；具体序列如下：
KI67：
F1:5'-CTCTGTACCTACCATCTCC -3' （SEQ ID NO.73）
R1:5'-CAGGAGGGAAAGTTCCA -3' （SEQ ID NO.74）
F2:5'-GGGAAAGTAGGTGTGAAAGA -3' （SEQ ID NO.75）
R2:5'-CCATCTCCTGCTGTCTC -3' （SEQ ID NO.76）
P1:5'FAM-AGGCACCTCCAACCACCACA-3'MGB （SEQ ID NO.77）
P2:5'VIC-ACCAGTCGGCAAGCTCACAC-3'MGB （SEQ ID NO.78）；
（14）检测STK15基因的引物序列为：SEQ ID NO.79和SEQ ID NO.80和SEQ ID NO.81和SEQ ID NO.82，检测STK15基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.83和SEQ ID NO.84；具体序列如下：
STK15：
F1:5'-ACAGGAGGCAAATCC -3' （SEQ ID NO.79）
R1:5'-CAGGTACTAGGAAGGTTATTG -3' （SEQ ID NO.80）
F2:5'-GGGTGGTCAGTACATGA -3' （SEQ ID NO.81）
R2:5'-CATCCGACCTTCAATCA -3' （SEQ ID NO.82）
P1:5'FAM-TGACCACTCTGCCCTGACCC-3'MGB （SEQ ID NO.83）
P2:5'VIC-TCCATCTTCCAGGAGGACCA-3'MGB （SEQ ID NO.84）；
（15）检测CCNB1基因的引物序列为：SEQ ID NO.85和SEQ ID NO.86和SEQ ID NO.87和SEQ ID NO.88，检测CCNB1基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.89和SEQ ID NO.90；具体序列如下：
CCNB1：
F1:5'-CTGTCAAGAACAAGTATGC -3' （SEQ ID NO.85）
R1:5'-CACAGCCTTGGCTAAA -3' （SEQ ID NO.86）
F2:5'-ATCGGTTCATGCAGAATAATTGA -3' （SEQ ID NO.87）
R2:5'-GGAGGGTACATTTCTTCATATTTG -3' （SEQ ID NO.88）
P1:5'FAM-AAGATCAGCACTCTACCACAGC-3'MGB （SEQ ID NO.89）
P2:5'VIC-TGGCAGTGACACCAACCAGC-3'MGB （SEQ ID NO.90）；
（16）检测MYBL2基因的引物序列为：SEQ ID NO.91和SEQ ID NO.92和SEQ ID NO.93和SEQ ID NO.94，检测MYBL2基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.95和SEQ ID NO.96；具体序列如下：
MYBL2：
F1:5'-CAGACTCTCAGGTGGA -3' （SEQ ID NO.91）
R1:5'-GACCTGGAAGTGGAAC -3' （SEQ ID NO.92）
F2:5'-GCCCTCTGTGCTCAAGA -3' （SEQ ID NO.93）
R2:5'-CAGACTGGTGCTATTCTCA -3' （SEQ ID NO.94）
P1:5'FAM-AGCACCAGGAGCCGCC-3'MGB （SEQ ID NO.95）
P2:5'VIC-CACACGCCTCTTCCTCTGCC-3'MGB （SEQ ID NO.96）；
（17)检测Survivin基因的引物序列为：SEQ ID NO.97和SEQ ID NO.98和SEQ ID NO.99和SEQ ID NO.100，检测Survivin基因的TaqMan探针序列为SEQ ID NO.101和SEQ IDNO.102；具体序列如下：
Survivin：
F1:5'-GCCATCCTTAAAACCAGA -3' （SEQ ID NO.97）
R1:5'-CGGTTGCACTTAGACAA -3' （SEQ ID NO.98）
F2:5'-CCTTCACATCTGTCACGA -3' （SEQ ID NO.99）
R2:5'-GCTGCCTCCAAAGAAAG -3' （SEQ ID NO.100）
P1:5'FAM-CCTCATGGCTACCAGCACCT-3'MGB （SEQ ID NO.101）
P2:5'VIC-ACGCAGTCCGCCCAGGT-3'MGB （SEQ ID NO.102）；
（18）检测ESR1基因的引物序列为：SEQ ID NO.103和SEQ ID NO.104和SEQ ID NO.105和SEQ ID NO.106，检测ESR1基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.107和SEQ ID NO.108；具体序列如下：
ESR1：
F1:5'-GCACCCTAGAAACAACATA -3' （SEQ ID NO.103）
R1:5'-GTCTCTATAACCAATGACCTC -3' （SEQ ID NO.104）
F2:5'-CTGGTGATTGTCAATTCATTCA -3' （SEQ ID NO.105）
R2:5'-GCAGTGTATCAAGTTAAAATAGTC -3' （SEQ ID NO.106）
P1:5'FAM-AGGTGCCTGAGACACAGACC-3'MGB （SEQ ID NO.107）
P2:5'VIC-TCTGCCTTCCCTGTGTGCCC-3'MGB （SEQ ID NO.108）；
（19）检测PGR基因的引物序列为：SEQ ID NO.109和SEQ ID NO.110和SEQ ID NO.111和SEQ ID NO.112，检测PGR基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.113和SEQ ID NO.114；具体序列如下：
PGR：
F1:5'-TGCCAAGAAGGTGAAAC -3' （SEQ ID NO.109）
R1:5'-ACAGCTTTGCATTGTCA -3' （SEQ ID NO.110）
F2:5'-CATGGAATGTCAACCTGTAA -3' （SEQ ID NO.111）
R2:5'-GCACAGTCCTATGTCAG -3' （SEQ ID NO.112）
P1:5'FAM-CCATCACTGCCAGGGACCCA-3'MGB （SEQ ID NO.113）
P2:5'VIC-CTCCACAGTGCCCATCATCA-3'MGB （SEQ ID NO.114）；
（20）检测BCL2基因的引物序列为：SEQ ID NO.115和SEQ ID NO.116和SEQ ID NO.117和SEQ ID NO.118，检测BCL2基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.119和SEQ ID NO.120；具体序列如下：
BCL2：
F1:5'-GGGTATGAAGGACCTGTA -3' （SEQ ID NO.115）
R1:5'- GTCGTACCACAAACTTCAAA-3' （SEQ ID NO.116）
F2:5'-GTGAGGAGAGGCAATGA -3' （SEQ ID NO.117）
R2:5'-CCTTGCTTTAAACTCACAG -3' （SEQ ID NO.118）
P1:5'FAM-TGCCTCTGCGAAGAACCTTG-3'MGB （SEQ ID NO.119）
P2:5'VIC-CAGCCAACGTGCCATGTGC-3'MGB （SEQ ID NO.120）；
和（21)检测SCUBE2基因的引物序列为：SEQ ID NO.121和SEQ ID NO.122和SEQ IDNO.123和SEQ ID NO.124，检测SCUBE2基因的TaqMan探针序列为：SEQ ID NO.125和SEQ IDNO.126；具体序列如下：
SCUBE2：
F1:5'-CCCAGTCTCAAATGTGA -3' （SEQ ID NO.121）
R1:5'-GCTGTTACTGTTAGAGAATGA -3' （SEQ ID NO.122）
F2:5'-GTGTCAACCTGGTGAATAA -3' （SEQ ID NO.123）
R2:5'-GGGAAGCAGGAAGTTC -3' （SEQ ID NO.124）
P1:5'FAM-TCCGTGGACATGAGCAGCC-3'MGB （SEQ ID NO.125）
P2:5'VIC-ACCTTGCCAGCTCTGTGCC-3'MGB （SEQ ID NO.126）；
其中，TaqMan探针序列的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有淬灭基团。
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