[发明专利]一种乳腺癌21基因检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种乳腺癌21基因检测试剂盒及其检测方法；所述试剂盒包括分别检测ACTB、GAPDH、RPLPO、GUS、TFRC、CD68、BAG1、GSTM1、HER2、GRB7、MMP11、CTSL2、KI67、STK15、CCNB1、MYBL2、Survivin、ESR1、PGR、BCL2和SCUBE2基因的引物和探针，试剂盒中21个基因各设计了两对引物和2条特异性探针，每个基因的引物和探针混合液放在一个反应管中，在QPCR上扩增时使用同一种缓冲液和程序，操作简便、节省检测时间并得到清晰准确的结果；本试剂盒适用广泛，对于科研和临床检测都适用，单或多样品，都能使用本试剂盒，检测结果快速准确。

技术领域

本发明涉及基因技术领域，具体涉及一种乳腺癌21基因检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，近20年来，以手术为中心，化疗、放射治疗、内分泌治疗为辅助的多学科综合治疗模式得到长足的发展，使乳腺癌的复发和死亡率显著降低，但仍然缺乏有效的方法能够较为准确地预测患者的复发风险并给予相应的治疗。

乳腺癌的复发风险评估系统是基于RT-QPCR的方法通过精确计算来检测肿瘤组织中的16个与肿瘤相关的目的基因表达，即乳腺癌21基因检测，由基因表达量计算来获得乳腺癌的复发评分（RS），通过RS值评估个体化的治疗效果和预测10年乳腺癌复发的风险以及接受化疗的效益比。乳腺癌21基因检测是美国临床肿瘤学会（ASCO）和美国国立综合癌症网络（NCCN）联合推荐的用于乳腺癌预后与化疗的多基因表达检测评估与服务，可以避免资源的浪费和对部分低危者的过度治疗。乳腺癌21基因包含16个乳腺癌相关基因和5个参考基因，即增值组(Ki67、 STK15、 Survivin、 CCNB1和MYBL2)、侵袭组(MMP1 1 和CTSL2)、HER-2组(GRB7和HER2)、雌激素组 (ER、 PgR、 BCL2和SCUBE2)、其他基因组(GSTM1、CD68和BAG1)、参照基因组（ACTB、GAPDH、RPLP0、Gus和TFRc）。

21基因检测需要从石蜡包埋切片中提取RNA，从该样本中抽提的RNA不可避免地会出现降解的情况。所以我们需要解决在RNA降解情况下，仍能准确的对21基因进行检测的问题。目前21基因检测的试剂盒一般采用SYBR Green法、Taqman荧光PCR法。SYBR Green法只需设计一对引物，在反应时需要加入SYBR GreenⅠ荧光染料即可，这种方法的缺点在于PCR的特异性差，灵敏度不高，结果并不是十分准确。Taqman荧光PCR法，需要设计引物和探针，简单的Taqman法只需设计一对引物和一条探针即可，而多重荧光PCR需要设计多对引物和探针，并且要保证多重PCR的各个引物之间不相互干扰以及各个探针之间不相互干扰，这就对引物和探针的要求比较高，设计难度大；此外，多重PCR对PCR的缓冲液和QPCR仪器都有一定的要求。21个基因检测有21个基因需要检测，将21个基因放在同一PCR管里检测并不现实，所以现有的多重荧光PCR法是将21基因分成了八组进行检测，也就是每个反应管里要加2-3个基因，这就增加了实验操作的复杂性，并且得到的实验数据也不是十分清晰明了，而且我们也不清楚同一个管里的几个基因是否相互之间有干扰。因此，我们需要找到一种特异性、灵敏度高，操作简便，数据准确的21基因检测试剂盒和方法。

发明内容

本发明的目的在于为了克服现有技术中存在的特异性灵敏度欠佳或操作复杂的缺陷，提供一种乳腺癌21基因检测试剂盒及其检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

第一方面，本发明涉及一种乳腺癌21基因检测试剂盒，其特征是21个基因为：ACTB、GAPDH、RPLPO、GUS、TFRC、CD68、BAG1、GSTM1、HER2、GRB7、MMP11、CTSL2、KI67、STK15、CCNB1、MYBL2、Survivin、ESR1、PGR、BCL2和SCUBE2，21个基因所对应的引物序列和TaqMan探针序列分别如下：