[发明专利]VPS10基因在酿酒酵母菌株低分泌蛋白A中的应用有效
| 申请号： | 201811001165.5 | 申请日： | 2014-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN108866027B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 陈叶福;肖冬光;韩月然;郭学武;董健;张翠英;杜丽平;马立娟 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N9/60 | 分类号： | C12N9/60;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 栗华楠 |
| 地址： | 300457 天津市滨海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | vps10 基因 酿酒 酵母 菌株 分泌 蛋白 中的 应用 | ||
1.胁迫条件下VPS10基因在酿酒酵母菌株低分泌蛋白酶A中的应用，其特征在于，所述应用是通过仅过表达VPS10基因构建酿酒酵母基因工程菌实现的；所述VPS10基因其GeneID为：852264；
所述胁迫条件为在氮缺乏的麦汁中进行啤酒发酵；所述酿酒酵母基因工程菌的宿主细胞为W303-1A。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酿酒酵母基因工程菌的构建方法包括如下步骤： (1)Yep-PVK质粒的构建① 以pPGK1质粒为模板，PCR扩增出强启动子PGK1p-终止子PGK1t基因片段；② 以酵母出发菌株W303-1A总DNA为模板，PCR扩增出VPS10基因；③以pUC6质粒为模板，PCR扩增出KanMX抗性基因；将PCR产物依次连接到YEP352表达载体上，得到重组质粒Yep-PVK； (2)VPS10过表达菌株的构建将游离过表达质粒Yep-PVK通过醋酸锂转化法导入到出发菌株W303-1A中，得到VPS10游离过表达重组菌株。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，检测低分泌蛋白酶A酿酒酵母菌株方法是以重组菌株的总DNA为模板，通过引物对：上游引物：TAACTGATCTATCCAAAACTGAA下游引物：GCTTATAGTAACGGAGGTGTCTT进行PCR扩增，可获得一条长度为1681bp的特异性条带，所述特异性条带核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示；出现上述特异性条带则证明被检测菌株为低分泌蛋白酶A酿酒酵母菌株。
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