[发明专利]一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法在审
申请号: | 201811001972.7 | 申请日: | 2018-08-30 |
公开(公告)号: | CN109097460A | 公开(公告)日: | 2018-12-28 |
发明(设计)人: | 李培峰;曾焕玉;高金宁;于忠杰 | 申请(专利权)人: | 青岛大学 |
主分类号: | C12Q1/6883 | 分类号: | C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12Q1/6869 |
代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人: | 李进 |
地址: | 266000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 含氮碱基 修饰 检测 检测领域 脉冲间隔 发现 | ||
1.一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法,其特征在于,测定不同含氮碱基的IPD值,根据IPD值的不同得到氧化修饰的含氮碱基。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述含氮碱基包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述含氮碱基为鸟嘌呤,所述氧化修饰的含氮碱基为8-oxoG。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,所述IPD值为氧化修饰的含氮碱基的IPD值与相应的含氮碱基的IPD值的比值。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述比值大于1时为氧化修饰的含氮碱基;反之,则不是。
6.根据权利要求1-5任一项所述的检测方法,其特征在于,步骤如下:
将待检测物测序,得到的序列依次测定含氮碱基的IPD数值,得到第一列IPD数值;
将待检测物的序列按照未氧化的形式依次测定含氮碱基的IPD数值,得到第二列IPD数值;
相同位置上的所述第一列IPD数值与所述第二列IPD数值相比得到比值,根据比值的大小判断是否为氧化修饰的含氮碱基;
进一步地,所述氧化修饰的含氮碱基的位点的覆盖率达到25倍以上。
7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述测序采用SMRT测序技术进行。
8.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述待检测物构建基因文库,纯化,平末端连接接头,结合测序引物和酶进行测序。
9.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述测序在测序仪上进行,优选为PacBio RSII测序仪或PacBioSequel测序仪。
10.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,在步骤根据比值的大小判断是否为氧化修饰的含氮碱基中,氧化修饰的含氮碱基的目标比值通过软件进行筛选,所述软件并给出氧化修饰的含氮碱基的位置。
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