[发明专利]一种与菠菜果实形态相关的KASP分子标记及检测引物与应用有效
| 申请号： | 201811005853.9 | 申请日： | 2018-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN109182572B | 公开（公告）日： | 2022-01-11 |
| 发明（设计）人： | 钱伟;徐兆生;刘志远;张合龙;王晓武;武剑 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所;中蔬种业科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;王璐 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 菠菜 果实 形态 相关 kasp 分子 标记 检测 引物 应用 | ||
1.一种与菠菜果实形态相关的KASP分子标记，其特征在于，所述分子标记位于菠菜全基因组的Chr3：54314034，其位点存在等位基因C/T，当等位基因为C时，菠菜果实表面无刺，当等位基因为T时，菠菜果实表面有刺。
2.用于检测权利要求1所述分子标记的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括：
正向引物1：
5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAAAAACCGCCATTATGAAAAAGAAGAAAG-3’；
正向引物2：
5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAAAAACCGCCATTATGAAAAAGAAGAAAA-3’；
反向引物：
5’-GCTTTAAGGCTGGGCAAAGTAGGAT-3’。
3.权利要求1所述的分子标记在检测菠菜果实形态方面的应用；
所述应用为根据所述分子标记等位基因的基因型判断菠菜果实表面是否有刺，当等位基因为C时，菠菜果实表面无刺，当等位基因为T时，菠菜果实表面有刺。
4.一种检测菠菜果实形态的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取待测菠菜样品的全基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，利用权利要求2所述的检测引物进行PCR扩增；
(3)利用荧光检测仪分析PCR产物，判断菠菜果实形态基因型，当检测的分子标记的等位基因为C时，菠菜果实表面无刺，等位基因为T时，菠菜果实表面有刺。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的PCR反应条件为：
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，在小于40℃条件下，采用荧光检测仪分析PCR产物。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，当分析PCR产物时的分型结果不理想，分析后可再进行一次PCR扩增，PCR反应结束后再次进行荧光检测分析；
再进行一次PCR扩增的PCR的反应条件为：
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