[发明专利]增强血管内皮细胞表达P选择素的方法

权利要求书

1.一种增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，包括以下步骤：

步骤(1)：设置冲击波设备作用模式及作用参数，包括：压强、频率、频次；

步骤(2)：准备继代培养的血管内皮细胞或实验小鼠体内血管内皮细胞，离心后，用10％的完全培养液重悬移植到培养皿中，再利用探头对细胞进行冲击波处理；

步骤(3)：完成冲击波处理后，继续培养，再分离血管内皮细胞利用荧光定量PCR方法检测P-选择素基因表达量，以GAPDH基因为参考内标。

2.根据权利要求1所述的增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的继代培养的血管内皮细胞制备方法为：从液氮中取出原代人心脏微血管内皮细胞冻存管，37℃水浴箱融化，传至已左旋多聚赖氨酸包被的培养瓶中，放入一定适量的内皮细胞培养基，在37℃、5％二氧化碳培养箱中培养，2～3d换液，4～5d传代1次，用胰酶消化细胞，实验采用第5代细胞。

3.根据权利要求2所述的增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其特征在于，所述原代人心脏微血管内皮细胞能够选用活体内的血管内皮细胞。

4.根据权利要求1所述的增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的冲击波参数范围为压力1.5-3.0bar、频率8-12Hz、频次为200次。

5.根据权利要求1所述的增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其特征在于，步骤(3)中，采用相对定量的方法对选择素基因表达水平进行计算，采用目的基因与内参基因之间Ct值之间的差异来确定目的基因的表达量，以GAPDH作为内参基因，每个RNA样品的定量PCR进行三个重复以消除系统误差。

6.根据权利要求1所述的增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其特征在于，步骤(3)中，采用的荧光定量PCR方法检测为：用High Pure RNAIsolation Kit提取总RNA，采用TaqMan Reverse Transcription Rengents试剂盒将总RNA反转录为cDNA，取反转录产物cDNA模板2.5μL，按照TaqMan Gene Expression MasterMix说明书进行定量PCR检测。

7.根据权利要求1所述的增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述继续培养的时间为60小时。

8.根据权利要求1所述的增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其特征在于，所述增强血管内皮细胞表达P选择素的方法不局限于表达P选择素。