[发明专利]检测对虾虹彩病毒的RPA引物和探针、试剂盒及其方法在审
| 申请号： | 201811008777.7 | 申请日： | 2018-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN108866244A | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 黄俊;张徐俞;陈刚;薛辉利;郑晓叶;付嫒媛;杨稳;骆志成;樊伟东 | 申请（专利权）人： | 杭州奥盛仪器有限公司;浙江科技学院;浙江省水产技术推广总站 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市西湖*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 虹彩病毒 引物 对虾 探针 核苷酸序 试剂盒 检测 技术检测 探针组合 早期监测 灵敏度 | ||
1.检测对虾虹彩病毒的RPA引物和探针组合，其特征在于，包括：一对引物和一个探针；
其中，所述引物的核苷酸序列为：
SHIV-F：5’-CAGATCAGAGCGCATTCGATCCCATAGGCACCGC-3’；
SHIV-R：5’-CGTAAGAGAACATGTGGTATCCGGTGAGTTCGGG-3’；
所述探针的核苷酸序列为：
SHIV-P：5’-ATACGAATCTTCAGATCGTATTCCCGTGA-FAM-dT-G-THF-C-BHQ1-dT-GCCGATTACTTCTC-P-3’。
2.如权利要求1所述的RPA引物和探针组合在用于制备检测对虾虹彩病毒的试剂盒和扩增反应试剂中的应用。
3.一种包含权利要求1所述的RPA引物和探针组合的检测试剂盒。
4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，检测试剂盒还包括RPA扩增试剂；
所述RPA扩增试剂包括RPA缓冲液、链置换DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白、UvsX重组酶、UvsY重组酶和280mM醋酸镁溶液。
5.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，检测试剂盒还包括阳性对照和阴性对照；
所述阳性对照为含有对虾虹彩病毒MCP基因片段的T载体；
所述阴性对照为超纯水。
6.一种基于RPA技术检测对虾虹彩病毒的方法，其特征在于，包括：
(1)提取待检样品的DNA；
(2)利用权利要求1所述检测对虾虹彩病毒的RPA引物和探针组合对所述DNA进行恒温基因扩增反应，并根据扩增产物的荧光变化判断扩增结果。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述恒温基因扩增反应的体系包括：总体积为50μl；其中，RPA Buffer 29.5μL，10μM SHIV-F 2.1μL，10μM SHIV-R 2.1μL，10μM SHIV-P0.6μL，280mM MgO AC 2.5μL，待检DNA 1～100ng余量为ddH2O。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述等温扩增的反应条件为：63℃反应30～60min。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述判断扩增结果的方法为：收集荧光信号，如果出现“S”型扩增曲线则判定为阳性；如果无“S”型扩增曲线，则判定为阴性。
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