[发明专利]氟硼荧-四嗪生物正交探针的制备方法

说明书

本发明公开氟硼荧‑四嗪生物正交探针及其制备方法，1)将BODIPY1‑2、TMSOTf溶于无水乙腈‑二氯甲烷混合溶剂中，混匀，将反应溶液在0℃条件下搅拌30min，使BODIPY1‑2活化；2)，向反应溶液中加入叔丁醇淬灭TMSOTf，然后滴加2,6‑二甲基吡啶和四嗪Tza‑Tzg预混合乙腈溶液，将混合溶液在0℃条件下搅拌反应10min；3)，将步骤2)中的反应用水淬灭，再用DCM萃取，将有机层分离，有机相用Na₂SO₄干燥、真空浓缩后，将反应产物经硅胶柱分离纯化，得到氟硼荧‑四嗪生物正交荧光探针。采用BODIPY化合物与四嗪类化合物反应发生反应生成氟硼荧‑四嗪生物正交探针，合成过程中产率极大提高，且探针水溶性得到了较大提升，同时具有荧光开启的性质，这些提升有利于该类探针在细胞成像上应用。

技术领域

本发明涉及生物探针技术领域，具体涉及氟硼荧-四嗪生物正交探针的制备方法。

背景技术

用荧光探针标记生物活性物质可实现在活体状态下对生命活动和病理过程的实时可视化。生物正交化学是一类能以足够的动力学、高度专一性地发生于生物体环境中的化学反应，并且反应过程对生物体本身的生命过程无干扰。因其生物兼容性好、特异性强、反应高效等特点吸引了化学生物学、医学影像学、药学等科学家的广泛关注。

氟硼荧(BODIPY)是一类生物医学研究领域中常用的荧光报告基团，由于该类分子优良的光学性能常被用于生命分子的选择性荧光标记中，但通常的氟硼荧类分子水溶性差。氟硼荧-四嗪生物正交探针是适合于标记目标化合物且不扰乱生物分子的活性、并且增加了氟硼荧分子的水溶性、随着生物正交反应的进行实现荧光信号的开启，从而达到选择性的降低荧光背景信号的目的。但是目前对于该类探针的研究还未见报道且其合成过程中产率很低。

基于此，研究开发了氟硼荧-四嗪生物正交探针的制备方法。

发明内容

本发明提供氟硼荧-四嗪生物正交探针的制备方法，采用BODIPY化合物与四嗪类化合物反应发生反应生成氟硼荧-四嗪生物正交探针，解决了现有细胞成像的荧光探针价格昂贵、合成步骤复杂、产率低、水溶性差等技术问题，与此同时大幅度提高荧光探针的荧光强度，降低荧光背景信号。

本发明通过下述技术方案实现：

氟硼荧-四嗪生物正交探针的制备方法，反应结构式如下：

具体操作方法为：

1)，将BODIPY1-2、TMSOTf溶于无水乙腈-二氯甲烷混合溶剂中，混匀，将反应溶液在0℃条件下搅拌30min，使BODIPY1-2活化；

2)，向反应溶液中加入叔丁醇淬灭TMSOTf，然后滴加2,6-二甲基吡啶和四嗪Tza-Tzg预混合乙腈溶液，将混合溶液在0℃条件下搅拌反应10min；

3)，将步骤2)中的反应用水淬灭，再用DCM萃取，将有机层分离，有机相用Na₂SO₄干燥、真空浓缩后，将反应产物经硅胶柱分离纯化，得到氟硼荧-四嗪生物正交荧光探针：1-8。进一步地，为了更好的实现本发明，所述步骤1)中无水乙腈-二氯甲烷混合液中无水乙腈与二氯甲烷的摩尔比为2:1。

进一步地，为了更好的实现本发明，所述步骤1)中BODIPY1-2、TMSOTf的摩尔比为1:5。

进一步地，为了更好的实现本发明，所述步骤二中2,6-二甲基吡啶、四嗪Tza-Tzg摩尔比为1:1。

进一步地，为了更好的实现本发明，所述步骤3)中，萃取反应产物所采用的溶剂为二氯甲烷。

进一步地，为了更好的实现本发明，所述步骤2)中，所述2,6-二甲基吡啶，四嗪Tza-Tzg摩尔比为5:5。