[发明专利]基于副溶血性弧菌的TDH的双重PCR检测试剂盒在审
| 申请号： | 201811010296.X | 申请日： | 2018-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN109022604A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 陈敏;陈洪友;张曦;宋元君;屠丽红;庄源 | 申请（专利权）人： | 上海市疾病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/63 |
| 代理公司： | 上海远同律师事务所 31307 | 代理人： | 张坚 |
| 地址： | 200336 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 副溶血性弧菌 检测试剂 双重PCR 筛查 引物 检测 样本 毒力基因检测 溶血素基因 一次性扩增 灵敏性 溶血素 耐热 菌群 与非 杂菌 替代 | ||
1.一种基于副溶血性弧菌的直接溶血素基因的双重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的直接溶血素基因检测用引物对，以及序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的不耐热溶血素检测用引物对。
2.根据权利要求1所述的基于副溶血性弧菌的直接溶血素基因的双重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括PrimeSTAR Max DNA Polymerase预混液和无菌双蒸水。
3.根据权利要求1所述的基于副溶血性弧菌的直接溶血素基因的双重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒的工作条件为：95℃预变性3min；接着进行热循环29次，过程包括95℃变性30s；62℃退火1min；72℃延伸1min；最后72℃延伸5min，12℃维持至产物检测。
4.一种根据权利要求1～3中任一项所述的双重PCR检测试剂盒在非诊断非治疗性地鉴别副溶血性弧菌流行菌群的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)DNA模板制备：提取待检测样品的DNA；
(2)试样PCR反应：以提取样品的DNA为模板，利用权利要求1～4中任一项所述的双重PCR检测试剂盒进行PCR扩增反应；
(3)PCR产物电泳检测及凝胶成像分析。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增反应的PCR反应体系总体积25μL，包括：PrimeSTAR Max DNA Polymerase预混液12.5μL，浓度为10μM的序列如SEQ ID NO.1所示的直接溶血素基因检测用引物1μL，浓度为10μM的序列如SEQ ID NO.2所示的直接溶血素基因检测用引物1μL，浓度为10μM的序列如SEQ ID NO.3所示的不耐热溶血素检测用引物1μL，浓度为10μM的序列如SEQ ID NO.4所示的不耐热溶血素检测用引物1μL，无菌双蒸水7μL，以及DNA模版1.5μL。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增反应的反应条件为：95℃预变性3min；接着进行热循环29次，过程包括95℃变性30s；62℃退火1min；72℃延伸1min；最后72℃延伸5min，12℃维持至产物检测。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海市疾病预防控制中心，未经上海市疾病预防控制中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811010296.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 双重RT-PCR检测花生条纹病毒和黄瓜花叶病毒的方法
- 一种利用双重PCR技术检测Cf-9和 I-2基因的方法
- 一种鉴别空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR引物及其鉴别方法
- 基于双重定量PCR的奶牛早期妊娠诊断引物对、探针及方法
- 一种同步检测检疫性细菌洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌的双重PCR方法
- 一种检测人类EGFR 基因T790M 和L858R 突变的方法和试剂盒
- 超级细菌两种耐药基因的双重qPCR试剂盒及检测方法
- 一种检测沙门氏菌并鉴别鸡白痢/鸡伤寒血清型的双重PCR引物、试剂盒、应用和方法
- 数字PCR检测新型冠状病毒核酸的方法及试剂盒
- 一种SARS-CoV和COVID-19病毒双重PCR检测方法
