[发明专利]一种具有抗炎症性肠病活性的羧甲基茯苓多糖及其制备与应用

说明书

本发明公开了一种具有抗炎症性肠病活性的羧甲基茯苓多糖及其制备方法与应用，所述羧甲基茯苓多糖是利用DEAE‑52纤维素层析柱、Sephadex‑G200+G150层析柱联用，对羧甲基茯苓粗多糖（已申请专利CN 105348407 A）进行纯化，用0.1 mol/L NaCl溶液洗脱得到羧甲基茯苓多糖（CMP33）。该多糖的组成为D‑葡萄糖，分子量为15.23×10⁴ Da，结构为（1→3）‑β‑D‑葡聚糖，具有三螺旋结构。经验证，本发明提供羧甲基茯苓多糖是一种具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节及抗炎症性肠病（IBD）的活性物质，可应用于功能食品与生物制药领域。

技术领域

本发明属于功能食品与生物制药领域，具体涉及一种具有抗炎症性肠病(IBD)活性的羧甲基茯苓多糖CMP33及其制备与应用。

背景技术

茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，收载于《中国药典》，位列中药“四君八珍”之中，别称玉灵、茯灵、松苓、茯菟等，具有很高的食补和药用价值，具有祛湿利尿、健脾和胃、安神宁心等功效，是一种药食两用的传统中药材。茯苓多糖为茯苓的主要有效成分，占茯苓菌核的80％以上。茯苓多糖经羧甲基化改性后可得到水溶性羧甲基茯苓多糖，具有抗肿瘤、抗炎、免疫增强等作用。目前，对于茯苓多糖羧甲基化改性、纯化以及评价其生物活性，并分析其构效关系等系统的研究工作仍处于起步阶段，尤其是对纯化羧甲基茯苓多糖的抗炎作用的研究鲜有报道。

发明内容

本发明以羧甲基茯苓粗多糖为原料，利用离子交换层析柱和葡聚糖凝胶层析柱分离纯化出羧甲基茯苓多糖，并对纯化组分羧甲基茯苓多糖CMP33进行了结构鉴定，评价了体外抗氧化活性、体外抗肿瘤活性以及体外抗炎活性。建立了TNBS致小鼠急性结肠炎模型，使用纯化组分CMP33对受试小鼠进行灌胃治疗，评价了其体内抗炎活性。本发明的目的是提供一种具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节及抗炎症性肠病(IBD)的活性羧甲基茯苓多糖及其制备方法，可应用于功能食品与生物制药领域。

本发明的目的通过如下技术方案实现。

一种羧甲基茯苓多糖CMP33的制备方法，所述多糖是利用DEAE-52纤维素层析柱、Sephadex-G200+Sephadex-G150层析柱联用，对现有的羧甲基茯苓粗多糖进行分离纯化，以0.1mol/L NaCl溶液为洗脱液洗脱得到的羧甲基茯苓多糖CMP33。

进一步地，所述现有羧甲基茯苓粗多糖由中国专利文献CN 105348407 A公开的羧甲基茯苓多糖的制备工艺制得。

进一步地，所述多糖CMP33的单糖组成为D-葡萄糖，所述多糖分子量为15.23×10⁴Da，结构为(1→3)-β-D-葡聚糖，含有(1→6)和(1→2)糖苷键，具有三螺旋结构。

本发明还提供了所述制备方法制得一种羧甲基茯苓多糖CMP33。

进一步地，所述CMP33对自由基DPPH、·ABTS+、·OH的EC50值分别为3.62mg/mL、3.55mg/mL、2.31mg/mL。

所述多糖CMP33在31.25-1000μg/mL浓度范围内对结肠癌细胞HT-29、肝癌细胞HepG-2、乳腺癌细胞MCF-7、胃癌细胞SGC-7901以及肺癌细胞A549细胞增殖有抑制作用，对应的IC50值分别为113.3μg/mL、282.7μg/mL、385.8μg/mL、79.56μg/mL、204.1μg/mL。

所述多糖CMP33能显著抑制脂多糖LPS诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β(IL-1β)，在31.25-1000μg/mL浓度范围内，对LPS诱导的NO、IL-6、TNF-α及IL-1β生成的抑制率分别达到52.31％、47.96％、79.68％及51.80％，具有抗炎活性。