[发明专利]一种重塑复合生物羊膜的制备方法

权利要求书

1.一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：

（1）取胎盘置于无菌工作台，将羊膜连同绒毛膜自胎盘上钝性分离后用生理盐水清洗血渍，得到洁净的羊膜，再用庆大霉素洗涤后放入DMEM培养基中培养4～5天，培养结束后冰冻储存，得到预处理的羊膜，备用；

（2）将活性干酵母加水配制成酵母乳，用柠檬酸钠溶液调节酵母乳的pH，加热升温，加入酵母乳质量0.5%的混合蛋白酶，酶解得到酶解液；

（3）按重量份数计，将40～50份上述酶解液、20～25亚麻油酸混合置于高速剪切机中，同时添加4～5份抗坏血酸，剪切乳化20～25min，得到混合乳液，将混合乳液放入旋蒸仪中，旋蒸10～15min，取下旋蒸瓶置于真空干燥箱中干燥，得到生物肽氧化剂；

（4）取葡萄籽置于蒸馏水中，进行超声波破碎提取，再转移至离心分离机中，离心后用微孔滤膜器过滤，去除滤渣，得到滤液，将滤液放入冷冻干燥机中冻干，得到葡萄籽冻干提取物；

（5）将瓜尔胶溶解于柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液中，制得瓜尔胶溶液，将预处理的羊膜置于瓜尔胶溶液中，随后将瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物混合，置于球磨机中进行磨碎处理3～4h，球磨完毕后在冰水浴下过200目筛，得到过滤液，将过滤液用流延设备制成生物羊膜，流延过程中用高能电子束辐照。

2.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的庆大霉素的浓度为4～5×10⁶U/L，DMEM培养基中青霉素和链霉素的含量为100～120×10³U/L，小牛血清的体积分数为10%，冰冻储存温度为-25～-20℃。

3.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的酵母乳的质量分数为15%的，柠檬酸钠溶液质量分数为20%，调节酵母乳的pH为4.5～5.0，加热升温后温度为50～55℃，混合蛋白酶由木瓜蛋白酶和细菌蛋白酶按质量比2:1混合而成，酶解时间为4～6h。

4.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的剪切乳化转速为3000～4000r/min，旋蒸温度为90～110℃，真空干燥箱设定温度为50～60℃，干燥时间为3～4h。

5.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的超声波破碎提取时控制提取温度为70～80℃，超声频率为30～35kHz，离心转速为3000～3500r/min，微孔滤膜器孔径为0.22～0.25μm，冷冻干燥温度为-60～-50℃。

6.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（5）所述的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液浓度为0.1mol/L、pH为6.6～6.8，瓜尔胶溶液的质量分数为1%，羊膜置于瓜尔胶溶液时控制羊膜与瓜尔胶的质量比为1︰1，瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物混合质量比为50︰5︰1，球磨时温度为-90～-80℃，高能电子束辐照时剂量为20～25kGy，流延设备温度控制为-25～-20℃。