[发明专利]一种检测RCA产物的方法及应用有效
| 申请号： | 201811014945.3 | 申请日： | 2018-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN109423510B | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 廖莎;陈奥;章文蔚;徐崇钧;傅德丰;许军强;赵杰 | 申请（专利权）人： | 深圳华大生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 518080 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 rca 产物 方法 应用 | ||
1.一种检测RCA产物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）以环状DNA分子为模板，经过滚环扩增，获得RCA产物；
采用稀释液对所述RCA产物进行稀释，所述稀释液包含非离子表面活性剂；
所述非离子表面活性剂为泊洛沙姆188；
（2）采用基于动态散射技术的粒径分析仪对所述RCA产物进行检测，获得粒径分析结果。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述RCA产物具有不同分子量大小。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，通过控制不同的滚环扩增时间来制备具有不同分子量大小的RCA产物。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述滚环扩增的时间为5-60min。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述滚环扩增的时间为5-30min。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述滚环扩增的时间为5-20min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）所述滚环扩增之后，还包括加入荧光分子修饰的探针与所述RCA产物杂交的步骤。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述荧光分子为ROX、FAM、HEX、VIC、Cy5或Cy3中的任意一种或至少两种的组合。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述荧光分子为ROX。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述荧光分子修饰的探针的加入量为0.5-5μM。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述荧光分子修饰的探针的加入量为1μM。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RCA产物为DNA纳米球。
13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述粒径分析结果包括RCA产物的分子大小、RCA产物的分子分布或RCA产物的均一性中的任意一种或至少两种的组合。
14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）之前，还包括制备环状DNA分子的步骤。
15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稀释液为PBS和加载缓冲液的组合。
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述稀释具体包括：将RCA产物与PBS缓冲液混合得到混合液，再向所述混合液中加入所述加载缓冲液。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述RCA产物与所述PBS缓冲液的体积比为1:(9-9999)。
18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述RCA产物与所述PBS缓冲液的体积比为1:(99-999)。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述RCA产物与所述PBS缓冲液的体积比为1:99。
20.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述混合液与所述加载缓冲液的体积比为(100-10000):1。
21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述混合液与所述加载缓冲液的体积比为(100-1000):1。
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